扫描电化学显微术(SECM)作为一种电化学方法,已经用于DNA片断斑点的表征.目前已经报道的关于SECM测定DNA的文章仅有四篇.在这些工作中,利用直接杂交法将目标DNA片段固定在载玻片上,分别通过银增强、鸟嘌呤氧化和具有电化学活性的杂交指示剂来表征目标DNA片段.我们首次将DNA夹心杂交法和SECM相结合,利用醇的高效催化作用,进行了DNA的定量分析,并对实际样品进行了测定.全文分为三部分:第一部分是用固相直接杂交法,通过SECM的收集模式测定DNA.首先利用生物素与链霉亲和素的结合反应,把生物素化的DNA探针固定在链霉亲和素覆盖的聚苯乙烯板上,然后加入生物素化的目标DNA,利用核酸分子杂交使目标DNA与探针发生杂交.杂交反应结束后,加入链霉亲和素—辣根过氧化物酶(HRP)结合物,将HRP连接到被测DNA上.利用扫描电化学显微镜的收集模式,通过检测HRP催化氢醌(H<,2>Q)和H<,2>O<,2>反应产生的1,4-苯醌(BQ)来间接检测目标DNA.第二部分用固相夹心杂交法,通过SECM的收集模式对pUC19质粒DNA的一个片段进行了检测.固相夹心杂交法中利用两个不互相重叠的DNA片段分别作为捕捉探针和检测探针来共同检测目标DNA.第三部分用固相夹心杂交法,通过SECM对pUC19质粒DNA进行了检测.在这部分工作中,我们沿用了第二部分的试验条件.对两个不同浓度的pUC19质粒DNA样品进行了检测,通过第二部分的峰电流—目标DNA浓度的工作曲线,得到的检测结果与样品的实际含量基本一致.