几种瘿蜂体内Wolbachia的PCR检测及其wsp和ftsZ基因分析

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Wolbachia为节肢动物等的细胞质共生细菌,能对宿主的繁殖模式进行调控,包括诱导胞质不亲和、孤雌生殖、雌性化及雄性致死。本文采集了分布于北美的4种瘿蜂,分别应用了Wolbachia的wsp基因和ftsZ基因的特异性引物,对其Wolbachia的感染进行了PCR检测,对获得的Wolbachia基因序列的碱基组、位点、转换/颠换率、遗传距离等进行了分析,并对瘿蜂Wolbachia进行了系统发育关系分析。主要结果归纳如下:(1)通过PCR检测,证实了栎结瘤瘿蜂Callirhytis punctata和摇鼓栎瘿蜂Dryocosmus palustris体内具Wolbachia共生。使用wsp基因检测到栎结瘤瘿蜂、摇鼓栎瘿蜂Wolbachia感染率分别为60%和36%,其wsp基因序列长度分别为564bp和561bp。使用ftsZ基因检测到了栎结瘤瘿蜂Wolbachia的感染,其基因序列长度为706bp。(2)使用MEGA5.0软件对wsp基因序列的比对分析显示:wsp基因序列共有622个位点,其中,保守位点386个、变异位点214个、简约信息位点133个、自裔位点72个。A、C、T、G碱基平均含量分别为22.9%、16.5%、31.2%和22.4%,A+T%为61.1%,明显高于C+G%的38.9%,且A、T碱基含量相差不大,可以推断出在wsp基因中存在明显的A/T偏向性。ftsZ基因序列共有687个位点,其中,保守位点681个、变异位点6个、简约信息位点3个、自裔位点3个,A、C、T、G碱基平均含量分别为32.5%、15.8%、25.9%和25.9%,A+T%为58.4%,稍高于C+G%的41.7%,且A、T碱基含量相差不大,ftsZ基因也存在明显的A/T偏向性。(3)经过碱基替换统计,wsp基因转换取代(transition)的速率为7.72%,颠换取代速率仅为4.67%,序列总数据集中转换数为38,颠换数为23,转换与颠换的比值R为1.62。ftsZ转换取代(transition)的速率仅为0.29%,颠换取代速率则为0,序列总数据集中转换属为2,颠换数为0,转换与颠换的比值R为8.22,密码子第一,三位点的碱基替换均表现为转换数为1,颠换数为0;密码子第二位显示转换和颠换数值都为0。从碱基饱和性分析得出wsp基因序列未达到饱和状态,ftsZ基因序列有部分饱和。(4)栎结瘤瘿蜂与摇鼓栎瘿蜂Wolbachia的wsp基因序列的一致性为94%。栎结瘤瘿蜂与同为栎瘿蜂族的Andricus solitarius(strain1)和Neuroterusmacropterus,及客瘿蜂族的Synergus crassicorni的Wolbachia的wsp基因序列完全一致。与其他瘿蜂Wolbachia的wsp基因的序列一致性介于79-99%之间。栎结瘤瘿蜂Wolbachia的ftsZ基因序列与其他瘿蜂Wolbachia的ftsZ基因的序列一致性介于99%-100%之间,一致性极高。(5)基于wsp基因序列的分析,几种瘿蜂的遗传距离介于0~0.2161,平均遗传距离为0.1076。其中,栎结瘤瘿蜂与Synergus crassicorni遗传距离最小,数值为0,与Ceroptres cerri的遗传距离最大,为0.2048;而摇鼓栎瘿蜂与Andricus mairei遗传距离最小,为0.0338,与Ceroptres cerri遗传距离最大,为0.1945;栎结瘤瘿蜂与摇鼓栎瘿蜂的遗传距离为0.0420。基于ftsZ基因序列的分析,几种瘿蜂的遗传距离介于0~0.0059之间,平均遗传距离为0.0027。其中,本研究对象与Callyrhytis glandium瘿蜂遗传距离为0;而与Synergus gallaepomiformis瘿蜂遗传距离最大,为0.0059。(6)采用4种方法进行了瘿蜂系统发育树的构建。基于wsp基因序列的系统树中,栎结瘤瘿蜂与栎瘿蜂族的A. solitaries (strain1)、N. macropterus和Biorhiza pallida,以及客瘿蜂族的S. crassicornis和舌蝇Glossina morsitans的Wolbachia聚集在同一分支,其中,MP系统树中,除以上的5种瘿蜂外还有一种果蝇Drosophila takahashii所感染的Wolbachia聚集在同一支,置信度达100,说明这种果蝇感染的Wolbachia与研究对象的所感染的地位是相近的。除客瘿蜂族的Ceroptres cerri感染的Wolbachia属于B群之外,其他瘿蜂感染的Wolbachia均属于A群。基于ftsZ基因序列的构建的系统发育树中,栎结瘤瘿蜂与同为栎瘿蜂族的Callyrhytis glandium、Biorhiza pallida以及客瘿蜂族的Synergus crassicornis聚合在同一分支,均属于A群。
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