动物内源性多肽CGA-N46对念珠菌细胞壁和线粒体的影响

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CGA-N46是人嗜铬粒蛋白N端具有抗真菌活性的多肽片段,研究CGA-N46对念珠菌细胞增殖的抑制作用,及对念珠菌细胞壁和线粒体的影响,旨在阐明CGA-N46的抑菌机理,并为CGA-N46作用靶标研究提供理论依据。本文以工程菌枯草芽孢杆菌DB1342(p-3N46)为实验菌株,发酵纯化制备CGA-N46样品。通过CGA-N46抑菌特性实验证实,CGA-N46对克柔念珠菌细胞增殖有很好的抑制作用,它主要抑制克柔念珠菌的对数生长期,并且对克柔念珠菌细胞的抑制率呈现浓度依赖性升高;通过透射电子显微镜观察到CGA-N46能使克柔念珠菌线粒体出现空泡化、髓样化,细胞质变得不均匀、产生白斑,细胞核膜部分溶解、不连续;通过检测β-1,3-葡聚糖酶活,发现CGA-N46不影响克柔念珠菌细胞壁的完整性;通过荧光探针DCFH-DA和DHE检测CGA-N46对克柔念珠菌活性氧(ROS)的影响,发现随着CGA-N46浓度的增加,克柔念珠菌细胞内活性氧(H2O2和02-)水平显著降低;Rh-123荧光探针检测线粒体膜电位实验表明,线粒体膜电位随着CGA-N46浓度的增加逐渐降低;研究CGA-N46对克柔念珠菌Ca2+-Mg2+-ATPase影响,表明CGA-N46能使Ca2+-Mg2+-ATPase酶活力升高;SDS-PAGE蛋白电泳检测线粒体蛋白结果表明,CGA-N46作用后,克柔念珠菌分子大小为13KDa、43KDa、84KDa的蛋白表达上调;Caspase3活性检测实验证实,CGA-N46对克柔念珠菌Caspase3没有影响。综上,动物内源性多肽CGA-N46能使克柔念珠菌超显微结构发生改变,影响克柔念珠菌线粒体功能,但不影响其细胞壁完整性。因此,CGA-N46可能通过线粒体途径抑制念珠菌细胞的增殖。
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