论文部分内容阅读
鼠害是历史悠久的全球性重要生物灾害之一,相对于传统的鼠害控制方法,不育控制因其更安全,且更为人道广泛使用,但不育剂在小肠和肝脏代谢损耗较大,若加大用量和使用频次,则会增加成本和环境残留风险,成为限制不育剂上市应用的关键因素。然而,至今尚乏从抑制肝肠药解酶的角度探索不育剂的减量增效的研究。本研究通过抑制P450酶降解炔雌醚(Quinestrol),从而达到降低炔雌醚用于控制鼠害的剂量,增强炔雌醚的药效,为开发出安全、高效且经济的鼠类不育剂提供思路和科学依据。本研究包括如下三个实验:(1)为确定炔雌醚分别对雌雄小鼠繁殖抑制的最低有效剂量,以不同剂量的炔雌醚油溶液分别连续3天灌胃雌雄小鼠,实验第7天解剖取材。结果发现炔雌醚可以影响健康成年雌雄小鼠的繁殖器官:与对照组相比,雌性小鼠的子宫在连续3天灌食不同剂量炔雌醚后表现出了不同程度的水肿,0.2mg/kg、1.0mg/kg和5.Omg/kg水肿更明显;随着剂量的增大,肝脏系数有增大的趋势;小肠系数、肾脏系数和脾脏系数有显著性差异。1.0mg/kg炔雌醚处理的雌鼠血清中FSH显著升高。以5.0mg/kg剂量灌食的雄性小鼠的附睾系数明显减小;炔雌醚0.008mg/kg组和0.04mg/kg组的精子密度和血清中促黄体素浓度均高于对照组;所有实验组的血清中睾酮浓度均下降;此外雄性1.0mg/kg和5.0mg/kg与雌性5.0mg/kg肝脏中CYP3A4酶含量有明显升高。炔雌醚对雌雄小鼠的繁殖均有抑制效果,但最低有效剂量不同,雌性有效剂量更低。(2)为确定克拉霉素和酮康唑分别与炔雌醚配伍使用对雄性小鼠繁殖的影响,将剂量为1.0mg/kg的炔雌醚分别与不同剂量的克拉霉素或酮康唑联合使用,连续3天灌胃雄性小鼠,实验第7天解剖取材。结果发现:炔雌醚联合克拉霉素对雄性小鼠内脏器官、繁殖器官、睾酮浓度、小肠中CYP3A4酶和蛋白含量均无显著影响。10.0mg/kg克拉霉素与1.0mg/kg炔雌醚联合使精子密度有明显降低。0.4mg/kg克拉霉素与1.0mg/kg炔雌醚联合使用后,肝脏中总CYP3A4酶显著降低至正常水平。炔雌醚与不同浓度的酮康唑联合使用,雄鼠肝脏重量显著降低,其它器官无显著变化。炔雌醚1.0mg/kg与酮康唑0.4mg/kg联合使用后导致雄性小鼠的精子密度有显著降低至正常水平,促黄体素浓度降低,酮康唑剂量增大促黄体素浓度也不恢复,联合酮康唑2.0mg/kg肝脏中CYP3A4酶降低至正常水平。本实验表明,1.Omg/kg炔雌醚更宜与酮康唑联合使用。(3)为确定酮康唑与炔雌醚配伍用于抑制雄性小鼠繁殖的最佳剂量,将剂量为1.0mg/kg和5.0mg/kg的炔雌醚分别与剂量为0.4mg/kg、2.0mg/kg和10.0mg/kg的酮康唑配伍,连续灌胃雄鼠3天,分别在第10天和第30天解剖取材。实验10天组,酮康唑浓度为0.4mg/kg时,脾脏明显增大,精子密度明显降低。酮康唑为2.0mg/kg时,精囊腺重量和睾酮浓度明显增大,恢复至正常水平。炔雌醚5.0mg/kg与酮康唑0.4mg/kg联合组小肠重量显著升高,小肠中CYP3A4含量显著降低,肝脏蛋白和CYP3A4酶含量显著升高。实验30天组,炔雌醚1.0mg/kg与酮康唑2.0mg/kg联合使用,肝脏重量、小肠中CYP3A4酶、每g肝脏中CYP3A4酶显著降低,精囊腺重量和睾酮浓度显著增大。酮康唑0.4mg/kg与炔雌醚5.0mg/kg联合组肝脏、小肠和脾脏重量显著降低,小肠和肝脏中CYP3A4酶含量显著降低。实验表明0.4mg/kg酮康唑与1.0mg/kg炔雌醚联合使用对雄性小鼠的繁殖有抑制作用,2.0mg/kg酮康唑可缓解炔雌醚对雄性小鼠精囊腺和睾酮的影响,且酮康唑对雄性小鼠的作用具有持效性。通过上述实验可见,5.0mg/kg炔雌醚可抑制雄性小鼠繁殖,酮康唑比克拉霉素更适合与炔雌醚配伍;0.4mg/kg酮康唑与1.0mg/kg炔雌醚联合使用对雄性小鼠的繁殖有抑制作用,2.0mg/kg酮康唑对雄性小鼠有恢复作用。炔雌醚可增加雌雄小鼠肝脏中CYP3A4酶含量,酮康唑和克拉霉素都可使肝脏CYP3A4酶进一步降低。本研究表明,可以通过联合酮康唑抑制炔雌醚降解,从而减少炔雌醚的用量,以减少成本,减少环境污染。