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目的:克隆全人源乙型肝炎病毒表面抗体可变区序列,研究机体对于乙肝疫苗的免疫应答反应,为筛选全人源乙肝抗体、更好的预防治疗慢性乙型肝炎提供基础。方法:(1)20μg乙肝疫苗强化免疫1名乙肝表面抗体阳性的健康志愿者,7 d后,检测其乙肝表面抗体滴度大于1000 m IU/ml,采集30 ml肝素抗凝血,采用流式细胞仪分选出CD19+/CD27+/Ig G+细胞群,挑选96个单细胞,置于20μl单细胞裂解液中,采用混合引物,单细胞RT-PCR获得重链、轻链可变区序列,将PCR产物纯化后克隆至p MD®19-T载体,进行测序,对测序结果采用DNA Star 5.0 Meg Align和Ig BLAST进行相似性和同源性分析。(2)分离3名志愿者接种乙肝疫苗前后外周血单个核细胞,提取总RNA,检测质量合格后进行基因表达谱分析,对测序原始结果过滤得到clean数据,随后进行差异表达基因分析、GO富集分析及KEGG信号通路分析。结果:(1)成功筛选出12个阳性抗体分泌细胞,12个阳性细胞的轻链和重链PCR产物序列具有很高的同源性。(2)得到829个差异表达基因,对差异基因进行GO富集分析,发现差异表达基因主要参与的生物过程是脂肪酰基Co A还原酶(醇形成)活性、铁离子转运、蛋白复合物结合、二价铁离子跨膜转运活性等;KEGG信号通路分析显示,差异表达基因主要参与Toll样受体信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、细胞因子相互作用受体、NF-Kappa B信号通路等。结论:(1)扩增得到了可能的特异性HBs Ab重链、轻链可变区基因序列;(2)初步得到了可能参与乙肝疫苗免疫应答过程的重要基因和调控通路。