目的:通过口服蒙药黄连后分析体内入血成分及代谢情况,并选择一种入血成分进行细胞实验探讨其作用机制。建立SD大鼠MIRI模型,以黄连为主的《黄连-4汤》预处理对MIRI引起的心肌损伤保护作用,进一步阐明黄连-4汤的保护心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法:1.按蒙医理论中蒙药黄连的临床剂量(5 g/60 kg)给予健康志愿者口服后采用超高效液相色谱、高分辨质谱LTQ-Orbitrap分析蒙药黄连在人血液和尿液中的代谢情况。2.以COCL2(氯化钴)刺激大鼠心肌H9C2细胞作为心肌缺血/再灌注损伤的细胞模型,通过小檗碱干预后检测细胞存活率、ROS检测、细胞凋亡检测、细胞钙离子通道影响及线粒体膜电位检测。3.以结扎前降支法(LAD)建立SD大鼠MIRI模型;随机分为假手术组、模型组、黄连-4汤组分低剂量(1.3g/kg)中剂量(2.6g/kg)高剂量(5.2g/kg),15天;丹参组(1.5g/kg),作为阳参。通过蛋白组学TMT技术、Western Blot、ELISA、HE染色法等检测方法进行实验。结果:1.口服黄连粉末后的人血浆和尿液中共分别鉴定得到了 14个和30个包括原型和代谢产物在内的成分。其中,3个原型成分(M2O,M26和M28)采用标准品予以比对是黄连碱、小檗碱、巴马汀。黄连的代谢途径主要与葡萄糖醛酸和硫酸偶联形成Ⅱ相代谢物,其中葡萄糖醛酸结合物可能是黄连在人血液和尿液中的主要形式。2.小檗碱对CoC12诱导的H9C2凋亡能够显著性的降低作用、氧化损伤具有保护作用、提高H9C2细胞的存活率。但没有引起线粒体膜电位变化及细胞钙离子通道的变化。3.高剂量组黄莲-4汤能够显著性的下调炎症因子IL-6、TNF-alpha的水平,且黄莲-4汤的效应显著性高于丹参组(P<0.05)。也能够显著性的上调氧化因子GSH-Px、SOD的水平,下调MDA的水平且与丹参组无明显差异。同时显著性的下调凋亡蛋白BAX水平、且效应接近于丹参组。上调BCL-2蛋白水平,且黄莲-4汤的效应显著性的高于丹参组。用药后共发现了 3827个蛋白,筛选了大鼠MIRI模型后及给药后表达显著变化的138个差异蛋白。通过对差异蛋白的聚类分析、GO富集及KEGG通路分析,发现了《WNT相关通路》以及《ROS氧化应激信号通路》可能参与心肌缺血再灌注的病理生理过程。总结:蒙药黄连-4汤具有对MIRI引起心肌细胞损伤的保护作用,尤其是黄连-4汤大剂量组效果明显。其机制抑制炎症因子IL-6、TNF-alpha及下调氧化因子MDA,上调GSH-Px、SOD水平和下调促凋亡蛋白BAX的水平,上调抑制凋亡蛋白BCL-2蛋白水平有关系。利用TMT技术用药后共发现了 3827个蛋白,筛选了大鼠MIRI模型后及给药后表达显著变化的138个差异蛋白。通过对差异蛋白的聚类分析、GO富集及KEGG通路分析,发现其中的《WNT相关通路》以及《ROS氧化应激信号通路》可能参与心肌缺血再灌注的病理生理过程。所以黄连-4汤可能通过干预WNT相关通路以及ROS氧化应激信号通路实现心肌缺血再灌注损伤的保护作用。除有关这两个信号通路以外差异表达的蛋白功能机制需待于进一步研究。同时本研究发现黄连-4汤的主药单药口服后人血液和尿液中分别鉴定得到了 14个和30个包括原型和代谢产物在内的成分。其中,成功鉴定了 3个原型成分(M20,M26和M28)分别是黄连碱,小檗碱和巴马汀。黄连的代谢途径主要与葡萄糖醛酸和硫酸偶联形成Ⅱ相代谢物,其中葡萄糖醛酸结合物可能是黄连在人血液和尿液中的主要形式。选择入血原型成分之一小檗碱进行细胞实验发现小檗碱通过抑制细胞凋亡和调控氧化应激保护大鼠心肌细胞H9C2的MIRI引起氧化损伤作用。在本实验中做的黄连的体内代谢及入血原型成分小檗碱的细胞试验是只是选择了黄连-4汤中的主要单味药黄连。所以有必要往后的实验当中进一步选择其它单味药及其它入血成分来进行全面的、系统的研究。通过对本研究课题的探索对蒙医药复方制剂寻找有效物质研究方面提供一个新的研究思路及新的研究方法。