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凋亡和自噬是两种重要的程序性死亡方式。本研究发现,在人非小细胞肺癌A549细胞膜上,肝细胞生长因子(HGF)受体c-Met高表达,而且c-Met的表达是HGF非依赖的。因此,使用c-Met小分子抑制剂SU11274作用于细胞,探讨SU11274是否能够诱导A549细胞发生凋亡或自噬。本文还对c-Met参与冬凌草甲素诱导A549细胞发生凋亡和自噬的机制进行了详细探讨。研究中发现,SU11274能够诱导A549细胞发生自噬性死亡。SU11274通过抑制c-Met的活性,促进ERK-p53通路的活化从而介导自噬的发生,SU11274还可以通过促进Bcl-2磷酸化,降低Bcl-2的表达水平,使Bcl-2-Beclin-1复合物解体,释放Beclin-1,促进自噬的发生,同时,ERK亦可以通过诱导Bcl-2磷酸化,促进Bcl-2-Beclin-1复合物释放Beclin-1,促进自噬的发生。大量的研究表明,活性氧(ROS)的产生对c-Met的表达有重要影响,因而我们对ROS在SU11274诱导A549细胞自噬过程中发挥的作用进行了研究。我们发现,SU11274处理A549细胞后,短时间内可诱导细胞中ROS,达到峰值后迅速进入平台期。进一步研究发现,ROS能够促进c-Met的过表达,表明ROS的产生负反馈SU11274诱导的自噬。ROS通过促进c-Met下游的PI3K-Akt和Grb2/SOS-Ras-p38促存活信号通路的活化发挥保护细胞的作用。虽然SU11274处理A549细胞短期内产生了保护性的ROS,最终细胞还是以自噬的方式走向死亡冬凌草甲素可以诱导A549细胞同时发生自噬和凋亡。并且抑制c-Met的表达能够上调冬凌草甲素的诱导作用。冬凌草甲素介导的Bax转位,细胞色素c释放和ERK-p53信号通路激活作用由于c-Met抑制剂的加入或者c-Met siRNA的加入而增强,表明c-Met在该过程中发挥对抗凋亡的作用。进一步研究了c-Met对自噬的影响,结果发现c-Met抑制剂促进了冬凌草甲素诱导的自噬,表现为M DC和GFP-LC3荧光颗粒的增加,LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化增加和Beclin-1蛋白表达的增加。进一步考察了自噬和凋亡的关系,使用3-MA, Beclin-1 siRNA或Atg5 siRNA抑制自噬的同时也抑制了凋亡最近的一些研究结果表明,c-Met在肺癌组织中呈现高表达,并且HGF/c-Met能促进肿瘤组织内部血管的生成,介导肿瘤细胞的增殖、侵袭,因此,HGF/c-Met(?)望成为肺癌治疗中的一个新的靶点。对HGF抑制冬凌草甲素诱导A549细胞凋亡的研究结果提示,HGF的加入部分逆转了冬凌草甲素诱导的Bcl-2/Bax比率的下调,caspase-3的活化,降低iPLA2的表达和PGE2的生成。我们进一步考察HGF的抗凋亡机制时发现,冬凌草甲素单独作用能抑制NF-κB-COX-2信号通路的激活以及其下游PGE2的生成,HGF的加入能部分逆转冬凌草甲素的抑制作用。另外,我们发现NF-κB和COX-2参与调节线粒体途径的相关蛋白表达。同时,COX-2也能调节iPLA2的蛋白表达。综上所述,A549细胞表面c-Met过度表达,c-Met抑制剂SU11274通过抑制c-Met的过度表达,激活下游ERK-p53信号途径及诱导Beclin-l-Bcl-2复合物解体而介导自噬的发生。同时SU11274通过抑制c-Met的过表达,诱导ROS的产生,产生的ROS可以通过激活c-Met下游PI3K-Akt 和 Grb2/SOS-Ras-p38信号途径负反馈自噬的发生。使用SU11274或者RNAi抑制c-Met的表达,能够促进天然药物冬凌草甲素诱导的A549细胞凋亡和自噬的发生,ERK-p53信号途径参与上述过程。同时,实验中发现,HGF通过激活N F-κB-COX-2信号通路抑制冬凌草甲素诱导的A549细胞凋亡。