背景恶性黑色素瘤(melanoma)是一种恶性程度高、生存率低、预后极差的肿瘤。从细胞生物学的角度来看，影响其预后的因素主要有两点：肿瘤细胞的增殖指数和肿瘤新生血管的生成程度。HOXB7基因属于同源盒基因，是位于17号染色体上的一种转录调控因子，有着在进化上高度保守的DNA序列，在胚胎发育、细胞分化等过程中起重要作用。有研究报道：HOXB7基因在恶性黑色素瘤细胞株中普遍高表达，可特异性诱导bFGF、VEGF、GROa等血管生成因子及肿瘤生长因子的表达水平上调，从而促使肿瘤新生血管形成，并促进肿瘤细胞进一步增殖与转移，是恶性黑色素瘤基因治疗中一个非常重要的靶点。 RNA干扰(RNAi)指通过小分子干扰RNA(siRNA)介导的序列特异性、转录后同源靶基因沉默现象，它可以通过降解靶基因mRNA序列来达到封闭基因表达的效果，目前RNA干扰已成为基因功能分析及治疗中不可缺少的一种重要技术手段。本实验针对HOXB7基因序列设计并合成3条siRNA序列，研究其抑制A375细胞株中HOXB7基因后对相应血管生成因子bFGF基因的表达下调水平，以及肿瘤细胞生长受抑制程度；并探讨HOXB7基因表达下调后对恶性黑色素瘤的肿瘤生长及瘤内微血管生成的影响。初步探索siRNA干扰HOXB7基因表达后对于恶性黑色素瘤临床治疗上的应用价值。 方法根据HOXB7基因mRNA序列设计出三条siRNA序列，采用化学合成法合成。利用脂质体2000介导的基因转染方法，将三条siRNA分别导入到人恶性黑色素瘤A375细胞中。RT-PCR分别检测转染24小时、48小时后，转染细胞中HOXB7及bFGF的mRNA水平，FCM检测48小时转染后细胞中bFGF蛋白表达情况，MTT法检测siRNA转染24小时后细胞增殖情况。根据实验结果选择一条有效的siRNA序列，构建siRNA体内表达载体。建立恶性黑色素瘤动物模型，将表达siRNA的质粒进行瘤内注射，观察其对肿瘤生长及肿瘤内血管生成的影响。 结果siRNA转染恶性黑色素瘤A375细胞24h及48h后，运用半定量RT-PCR技术分别检测HOXB7基因及其诱导的血管生长因子bFGF基因mRNA表达水平，实验结果显示HOXB7基因表达受抑制后，其诱导的bFGF基因表达水平亦明显下调，具有统计学差异。siRNA转染细胞48h后，流式细胞学检测HOXB7基因诱导的血管生成因子bFGF蛋白表达水平较对照组有明显下降，具有统计学差异。MTT检测转染后肿瘤细胞增殖情况亦较对照组明显受到抑制。动物实验显示HOXB7siRNA质粒注射组的裸鼠肿瘤体积明显小于阴性质粒注射组与生理盐水对照组，具有统计学差异。第八因子相关抗原免疫组化病理切片染色也观察到HOXB7siRNA质粒注射组瘤内微血管密度显著减少，具有统计学差异。 结论靶向HOXB7基因的siRNA转染恶性黑色素瘤A375细胞后，可以分别在mRNA水平及蛋白水平有效沉默HOXB7基因及其调控的血管生成因子bFGF的表达，对恶性黑色素瘤细胞的生长、增殖亦起到一定的抑制效应。动物实验表明针对HOXB7基因的siRNA表达载体可有效抑制肿瘤生长及肿瘤内血管生成。