白子草多糖的分离纯化及其降血糖作用研究

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白子草[Gynura divaricata (L.)DC.]为菊科菊三七属植物白子菜的干燥叶,又名白背三七口白东枫等口其作为地方药材被收录于《福建省中药材标准》(2006版)。民间以其地上部分广泛用于治疗糖尿病、高血压病、高脂血症等,具有良好的效果。关于白子草的研究,主要集中在白子草黄酮类成分上,较少涉及白子草多糖(Gynura divaricata polysaccharides,GDPs)的研究,而且涉及白子草多糖的研究也是白子草粗多糖的研究,对白子草多糖的分离纯化较少。据文献报道,白子草粗多糖的主要药理作用有降血糖和抗癌两个作用。本论文对白子草粗多糖进行了分离纯化,得到两种精制多糖组分,并对其结构进行了初步研究,且对其中的一种组分进行了降血糖药效的研究。分别对白子草多糖中的中性多糖含量和酸性多糖含量的测定条件进行了优化。采用苯酚-硫酸法测定粗多糖中的中性多糖含量为22.3%。采用间羟基联苯法测定粗多糖中的酸性多糖的含量为33.6%。对白子草原料进行了预处理,将白子草干燥叶粉碎过20目筛后,先用石油醚(沸程60~90℃)脱脂,再用95%乙醇回流提取,以除去其中的单糖、寡糖等小分子物质。采用加热回流提取白子草中的多糖类成分,经过醇沉,得到白子草粗多糖。白子草粗多糖经酶法-Sevag法脱蛋白得到纯化多糖。纯化多糖经DEAE-Sepharose Fast Flow分离,以水、不同浓度梯度的氯化钠洗脱,苯酚-硫酸法跟踪检测组分,得到中性多糖GDPs-1,酸性多糖GDPs-2、GDPs-3、GDPs-4。由于中性性多糖GDPs-1和酸性多糖GDPs-4的含量较低,本文只对酸性多糖GDPs-2、GDPs-3进行了进一步纯化。GDPs-2、GDPs-3各多糖组分再分别经Sephacryl S-300柱分离,0.2mol·L-1氯化钠溶液洗脱,紫外481nm检测,收集各组分,透析72h,冷冻干燥得白子草多糖精制多糖GDPs-2、GDPs-3。白子草多糖精制多糖GDPs-2、GDPs-3经Sephacryl S-300HR柱层析的结果表明GDPs-2、GDPs-3为均一组分;纯度分别为87.3%和90.9%。采用凝胶色谱法测得GDPs-2、GDPs-3的分子量分别为2.03×105Da和4.29×105Da;采用高效液相色谱法测定了GDPs-2、GDPs-3的单糖组成及摩尔比,实验结果表明:GDPs-2的单糖组成为葡萄糖醛酸和木糖,葡萄糖醛酸和木糖的摩尔比为1.1:0.63; GDPs-3的单糖组成为鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、木糖和半乳糖醛酸,其摩尔比为:0.32:6.0:0.21:1.75:4.3;采用红外光谱确证了GDPs-2、GDPs-3还有葡萄糖醛酸,由1H-NMR并推知GDPs-2和GDPs-3的糖苷键型为α构型。将分离纯化得到的GDPs-3组分进行糖尿病小鼠的降血糖作用研究,分别考察了该组分对糖尿病小鼠的血糖、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肝糖原的影响,结果表明,GDPs-3给药量为37mg-kg-1.d-1和60mg-kg-1.d-1具有降血糖作用,并能够使SOD含量升高(P<0.05)、(P<0.01),MDA含量降低(P<0.05),表明该组分降血糖作用机制可能是通过提高机体抗氧化酶活性,清除活性氧自由基以解除自由基对肝脏的损害实现的。当给药量为60mg-kg-1.d-1能够使糖尿病小鼠的肝糖原含量升高,证明该组分可以增加肝糖原的储存能力,从而使血糖的含量降低。
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