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目的探究取自SD大鼠中,新生幼鼠背部真皮组织体外培养的皮肤成纤维细胞(skin flbroblast,SF)经血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导转化为皮肤肌成纤维细胞(skin myofibroblasts,SMF)的过程中,Hedgehog信号在皮肤肌成纤维化发生、发展中的调控机制,以及研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,Ac-SDKP)通过调控刺猬(Hedgehog,HH)信号,抑制血管紧张素Ⅱ诱导的皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的作用和机制,从而发挥其抗皮肤纤维化的作用,为以后临床应用提供更加科学的理论依据。方法原代培养新生SD乳鼠背部真皮中分离出SF并进行培养至第二代细胞,予以AngⅡ诱导向肌成纤维细胞分化,并予以Ac-SDKP、SMO阻滞剂(GDC-0449)、GLI阻滞剂(GANT61)预处理。通过划痕实验检测细胞迁移能力。通过免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscleactin,α-SMA)的定位与表达。Western-blotting技术检测表达在肌成纤维细胞内Ⅰ型胶原(ColⅠ)、转入因子蛋白GLI(GLI1,GLI2,GLI3)、跨膜Patched蛋白(PTC)、Smothened原癌基因(SMO)、SHH、α-SMA的水平。统计学方法是将实验中的所得的原始数据先经Excel 2013整理,整理后构建数据库通过SPSS22.0软件包进行统计学分析,数据均以均数±标准差((?)±s)表示分析所得结果,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05为差异才具有统计学意义。结果1细胞划痕实验显示,采用Ac-SDKP诱导皮肤肌成纤维细胞划痕实验0小时与48小时相比结果显示,AngⅡ诱导的皮肤肌成纤维细胞迁移情况较正常肌成纤维细胞明显增强,AngⅡ与给予的Ac-SDKP相结合,相比结果显示,AngⅡ与Ac-SDKP相结合较Ac-SDKP诱导皮肤肌成纤维细胞迁移情况较明显好转。2免疫细胞化学法结果显示,AngⅡ诱导组细胞中α-SMA的阳性表达较空白对照组增强;而Ac-SDKP预处理组可明显抑制α-SMA的阳性表达。3免疫印迹结果显示,采用SMO受体阻断剂GDC-0449诱导皮肤肌成纤维细胞,与对照组相比,在AngⅡ诱导组中Col I、α-SMA、SHH、SMO、GLI1、GLI2阳性表达分别上调1.9倍、4.3倍、3.5倍、2.4倍、1.7倍、3倍,PTC、GLI3阳性表达分别下调86%和80%,与AngⅡ诱导组相比,在AngⅡ与GDC-0449阻断剂组中Col I、α-SMA、SHH、SMO、GLI1、GLI2阳性表达分别下调50%、55%、49%、52%、43%、45%,PTC、GLI3阳性表达分别上调1.9倍和2.9倍(P<0.05)。采用GLI1/2阻滞剂GANT61诱导皮肤肌成纤维细胞,与对照组相比,在AngⅡ诱导组中Col I、α-SMA、SHH、SMO、GLI1、GLI2阳性表达分别上调2.9倍、5.1倍、4.9倍、3.2倍、5倍、1.7倍,PTC、GLI3阳性表达分别下调82%和69%(P<0.05),与AngⅡ诱导组相比,在AngⅡ与GANT61阻断剂组中Col I、α-SMA、SHH、SMO、GLI1、GLI2阳性表达分别下调32%、37%、20%、51%、48%、49%,PTC,GLI3阳性表达分别上调5.4倍和1.4倍(P<0.05)。采用Ac-SDKP诱导皮肤肌成纤维细胞,与对照组相比,在AngⅡ诱导组中Col I、α-SMA、SHH、SMO、GLI1、GLI2阳性表达分别上调2.9倍、1.4倍、1.6倍、4.8倍、2倍、1.8倍,PTC、GLI3阳性表达分别下调85%和63%(P<0.05),与AngⅡ诱导组相比,在AngⅡ与Ac-SDKP组中Col I、α-SMA、SHH、SMO、GLI1、GLI2阳性表达分别下调56%、66%、73%、50%、41%、51%,PTC,GLI3阳性表达分别上调2.7倍和5.6倍(P<0.05)。结论Ac-SDKP可能通过抑制Hedgehog信号从而拮抗AngⅡ介导的皮肤肌成纤维细胞的分化,发挥其抗纤维化的作用。图11幅;表8个;参61篇。