用转座子系统构建IFNβ诱导mCherry转基因小鼠模型

来源 :福建师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shidai19860115
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在高等生物的免疫系统中,先天免疫系统与后天免疫系统相互协作,共同抵御着外源病原体入侵以及维持机体健康。先天免疫作为防御外源病原体入侵的第一道防线,更是首当其冲,不可或缺的。而在先天免疫中,干扰素作为其中的一类高活性的天然糖蛋白,在抗病毒、抗增生以及免疫调节中发挥着重要作用。目前发现的先天免疫通路中包括TLR、RIG-I以及cGAS-STING通路都会在机体受到相应的病原体相关分子模式的刺激下诱导产生Ⅰ型干扰素,从而发挥抗病抗毒作用。此外还有研究表明IFNβ对于肿瘤的治疗有一定的帮助。干扰素作为天然免疫应答的重要指示剂,检测其表达位点以及水平显得尤为重要。然而,干扰素只在一些类细胞中表达,一旦释放到血液中后将被稀释,使得检测的灵敏度要求较高。另一方面,由于绿色荧光背景较高,不方便准确观察,为此我们选择红色荧光mCherry来作为由IFNβ启动子诱导表达蛋白转来构建转基因小鼠模型。我们利用已经优化截短后的IFNβ启动子连接mCherry蛋白并在细胞水平验证了其可行性。然后将Sleeping beauty转座子/转座酶系统的质粒通过显微注射到小鼠胚胎中,将注射后的胚胎移植到假孕母鼠中,通过对子代小鼠基因组进行PCR扩增及测序,结果表明我们成功构建了IFNβ启动mCherry的转基因模型小鼠。随即让子代进行交配,建立能够稳定表达的转基因小鼠系。通过分离转基因小鼠的原代肺成纤维细胞,进行相应的刺激,结果表明,该转基因小鼠能后对相应的刺激物进行应答并表达mCherry,mCherry的表达与IFNβ的表达相一致,因此说明我们成功构建了IFNβ诱导表达mCherry转基因小鼠模型。我们期望该小鼠模型未来可于相关研究及药物开发。
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