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目的从人骨骼肌组织中分离培养血管外膜细胞(pericytes/perivascular cells,PCs)并进行生物学特性鉴定,探究其对人脐带血(Umbilical cord blood,UCB)CD34~+细胞的体外支持效力。方法1.利用多参数流式细胞术(multiparameter fluorescence-activated cell sorting,MP-FACS)从人骨骼肌中分选表型为CD146~+CD56~-CD34~-CD144~-CD45~-的人骨骼肌血管外膜细胞(human skeletal muscle-derived pericytes/perivascular cells,hMD-PCs),并对其进行生物学鉴定;2.采用密度梯度离心法分离获取人UCB单个核细胞(Mononuclear cells,MNCs),利用免疫磁珠法分选UCB CD34~+细胞;3.建立以CD146~+hMD-PCs为滋养层的UCB CD34~+细胞体外培养体系,同时设置以人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)为滋养层的阳性对照培养体系及无滋养层的UCB CD34~+细胞单独培养体系为空白对照,分别于共培养1W、2W、4W对各培养体系的细胞数量、集落形成能力、免疫表型及培养上清液造血因子表达水平进行检测及统计分析。结果1.通过MP-FACS分选出CD146~+hMD-PCs,回测纯度为(91.5±1.85)%(n=5);其表达MSCs表面标志物CD105、CD90、CD73、CD44,不表达内皮细胞及造血细胞表面标志物CD31、CD34、CD45;经诱导分化培养可向软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞分化,并保留其成肌性;2.经免疫磁珠分选获取的脐血CD34~+细胞阳性率为(85.35±3.25)%;3.UCB CD34~+细胞按5×10~4/孔的密度分别与CD146~+hMD-PCs、BM-MSCs共培养:(1)共培养1W后,CD146~+hMD-PCs组、BM-MSCs组的细胞数分别为(5.36±2.63)×10~4、(4.08±1.88)×10~4,两组细胞数无显著增加,空白对照组的细胞数为(0.78±0.47)×10~4,细胞数明显下降;共培养2W后,CD146~+hMD-PCs组、BM-MSCs组的细胞数分别为(5.78±1.41)×10~4、(5.2±1.59)×10~4,细胞数有所增长,而空白对照组几乎无细胞存活;共培养4W后,CD146~+hMD-PCs组、BM-MSCs组细胞数呈下降趋势,分别为(3.55±2.65)×10~4、(2.86±1.27)×10~4;共培养至5W时几乎无细胞存活。经统计分析,实验组与阳性对照组1W,2W,4W的细胞数差异均无统计学意义(P>0.05,n=6)。空白对照组1W、2W的细胞数分别与实验组、阳性对照组相比,差异均有显著统计学意义(1W P<0.01,2W P<0.001,n=6)。(2)集落培养显示,CD146~+hMD-PCs组、BM-MSCs组造血干祖细胞在共培养1W、2W、4W后的集落形成能力无显著统计学差异(P>0.05,n=5),无滋养层培养体系因细胞数明显减少未能行集落培养。(3)经流式细胞术检测,CD146~+hMD-PCs组共培养1W、2W、4W有核细胞中CD45~+细胞、CD34~+CD33~-细胞、CD14~+细胞、CD10~+/CD19~+细胞的比例与BM-MSCs组比较,无统计学差异(P>0.05,n=6)。(4)ELISA检测培养上清液细胞因子表达水平,CD146~+hMD-PCs组与BM-MSCs组IL-3、IL-6、VEGF表达水平无统计学差异,CD146~+hMD-PCs组HGF、MCSF、TNF-α及IFN-γ水平较BM-MSCs组高(P<0.05),BM-MSCs组上清液中SCF及TPO较CD146~+hMD-PCs组高(P<0.05)。结论CD146~+hMD-PCs具有与BM-MSCs相似的生物学特性,且CD146~+hMD-PCs做为滋养层细胞像BM-MSCs一样具有体外造血支持作用。