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伏马毒素(Fumonisins,FBs)是由串珠镰刀菌、轮枝镰刀菌等产生的次级代谢产物,污染世界各地的玉米、小麦、高粱、水稻等粮食作物,能引起人患食管癌、马脑白质软化综合症、猪肺水肿、啮齿动物肝脏和肾脏损伤等。其中伏马毒素B1(FB1)的毒性最强,污染最广泛,也是目前研究最多的类型。本研究以体外培养的猪肠上皮细胞IPEC-J2作为研究对象,探究FB1对猪小肠上皮细胞的屏障功能及细胞自噬的影响,为其致病机制的研究奠定理论基础。本试验通过体外培养IPEC-J2细胞,研究不同浓度的FB1对IPEC-J2细胞的毒性作用机制。采用了MTT法检测FB1染毒IPEC-J2细胞24 h和48 h后细胞活力的影响,结果表明10-50μg/mL的FB1染毒细胞24 h,对细胞存活率没有显著性影响;但25μg/mL与50μg/mL FB1染毒细胞48 h后,显著性降低了细胞存活率。本试验通过研究不同浓度的FB1对IPEC-J2细胞紧密连接、粘蛋白与细胞旁通透性的影响,来探讨FB1对猪小肠上皮细胞屏障功能的影响。研究结果50μg/mL的FB1染毒细胞48 h后显著降低了紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1 mRNA与蛋白水平的表达。10-50μg/mL的FB1抑制了IPEC-J2细胞粘蛋白MUC1 mRNA的表达,而25μg/mL与50μg/mL的FB1促进了粘蛋白MUC2 mRNA的相对表达量。50μg/mL的FB1染毒细胞24 h和48 h后,都显著增加了细胞旁的通透性。表明FB1引起IPEC-J2细胞屏障功能损伤。研究FB1对猪小肠上皮细胞自噬的影响,结果发现50μg/mL的FB1显著降低了LC3-Ⅱ/ⅡmRNA与蛋白水平的表达,自噬相关基因Beclin 1、p62、ATG5与ATG7mRNA的相对表达量也降低。这表明FB1抑制了IPEC-J2细胞自噬。同时检测了细胞自噬AKT/mTOR、AMPK/mTOR信号通路,发现FB1可能是通过激活AMPK/mTOR信号通路来抑制细胞自噬。用雷帕霉素(Rapmacin)作为自噬诱导剂来研究细胞屏障功能与细胞自噬之间的关系。研究结果75 pM的雷帕霉素显著抑制了50μg/mL的FB1诱导的细胞旁通透性增加,表明雷帕霉素对FB1诱导的细胞屏障功能损伤具有保护作用。FB1可能是通过抑制自噬来诱导猪肠上皮细胞屏障功能损伤。