氨气是畜禽舍内危害最大的气体,过量的氨气降低了动物福利,对动物的健康产生了不利效应,严重影响养殖业的发展。鸡对氨气比较敏感,长期在高浓度的氨气环境中生长会导致各种疾病的发生。肝脏是机体内最大的腺体,它在代谢、解毒和免疫中均起着非常重要的作用。然而,目前关于氨气对鸡肝脏组织毒性作用的研究却很少。因此,本研究以肉鸡为研究对象,成功建立氨气中毒模型,通过探究氨气暴露对氧化应激、能量代谢、细胞凋亡和自噬的影响及分子机制,评估氨气对肉鸡肝脏组织的毒性作用。将108只1日龄罗斯308肉鸡随机分成低氨组(对照组)、中氨组和高氨组,并饲养在不同的环境控制舱内。低氨组舱内氨气浓度保持在5 mg/m~3以下。中氨组的氨气浓度:1-21日龄为10±0.5 mg/m~3;22-42日龄为20±0.5 mg/m~3。高氨组的氨气浓度:1-21日龄为15±0.5 mg/m~3;22-42日龄为45±0.5mg/m~3。三组环境控制控制舱内温度和湿度是一致的。在第14、28和42天时,鸡被安乐死,并快速采集肝脏样品。采用光学显微镜和电子显微镜观察肝脏组织形态学变化,TUNEL分析测定凋亡细胞,试剂盒检测氧化应激指标及ATPase活性变化,实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹试验检测mi RNA表达及能量代谢、细胞凋亡和自噬相关基因的m RNA和蛋白表达。研究结果表明:(1)组织形态学的结果显示过量氨气暴露可引起肉鸡肝脏细胞凋亡和自噬的发生,导致肝脏发生损伤。(2)TUNEL分析的结果显示过量氨气暴露导致凋亡细胞数目增多,细胞凋亡率以剂量依赖方式显著升高。(3)过量氨气暴露引起氧化应激指标(MDA、CAT、SOD、T-AOC和GSH-Px)的显著改变,并且氧化应激指标随着氨气浓度和暴露时间的增加呈剂量和时间依赖性变化,说明过量氨气诱导肝脏发生氧化应激。(4)能量代谢指标的检测结果表明过量氨气显著抑制了肝脏ATPase活性和能量代谢相关基因的表达,并激活了AMPK通路,说明过量的氨气吸入导致细胞能量代谢紊乱,代偿性激活了AMPK以满足细胞能量需求。(5)细胞凋亡指标检测结果进一步从分子水平证实,过量氨气暴露触发了线粒体凋亡信号通路,诱导鸡肝细胞凋亡的发生,并且首次揭示mi R-187-5p通过靶向apaf-1参与了氧化应激介导的线粒体通路细胞凋亡。(6)自噬指标的检测结果从m RNA和蛋白水平进一步证实了过量氨气暴露激活APMK/m TOR/ULK1信号通路,诱导了鸡肝脏组织自噬的发生。综上所述,过量氨气通过破坏鸡肝脏组织氧化与抗氧化之间的平衡导致氧化应激,引发能量代谢紊乱,通过mi R-187-5p靶向apaf-1调控线粒体通路细胞凋亡,激活AMPK/m TOR/ULK1信号通路诱导鸡肝脏细胞自噬,说明过量氨气通过氧化应激介导肝脏细胞凋亡和自噬,进而发挥其毒性作用。