【摘 要】
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目的明确β-synuclein在脊髓损伤中的表达情况,研究β-synuclein在神经元氧化应激损伤中的作用及其机制。材料与方法构建SD大鼠的脊髓损伤模型。对假手术组和脊髓损伤组的脊髓组织进行蛋白质质谱分析、免疫组织化学和q PCR,明确β-synuclein在脊髓损伤中的表达情况。通过RT-PCR钓取大鼠β-synuclein基因,酶连、转化构建真核重组质粒GFP-β-synuclein。利用s
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目的明确β-synuclein在脊髓损伤中的表达情况,研究β-synuclein在神经元氧化应激损伤中的作用及其机制。材料与方法构建SD大鼠的脊髓损伤模型。对假手术组和脊髓损伤组的脊髓组织进行蛋白质质谱分析、免疫组织化学和q PCR,明确β-synuclein在脊髓损伤中的表达情况。通过RT-PCR钓取大鼠β-synuclein基因,酶连、转化构建真核重组质粒GFP-β-synuclein。利用si RNA构建干扰片段siβ-synuclein,并在293T细胞中过表达GFP-β-synuclein和干扰片段,通过Western Blot验证β-synuclein的表达和干扰效率。培养大鼠原代海马神经元,并用钙磷转染试剂过表达GFP-β-synuclein质粒和干扰片段,用Image-Pro Plus测量海马神经元突起的长度和分支点数目。构建过表达β-synuclein的SH-SY5Y细胞,加入L-谷氨酸钠诱导SH-SY5Y细胞发生氧化应激损伤,用CCK-8试剂检测β-synuclein对L-谷氨酸钠诱导SH-SY5Y氧化应激损伤的影响。结果1)使用路易斯维尔损伤系统装置,建立了SD大鼠脊髓损伤模型;2)对假手术组和脊髓损伤组的脊髓组织进行蛋白质质谱分析和主成分分析结果示:β-synuclein是脊髓损伤中最具特征的变化最大的蛋白之一;3)免疫组织化学、q PCR结果示:β-synuclein在SD大鼠脊髓损伤中的表达量下调,脊髓损伤程度越重,下调越明显;4)成功构建真核重组质粒GFP-β-synuclein,干扰片段siβ-synuclein;5)培养大鼠原代海马神经元,并过表达GFP-β-synuclein质粒和干扰片段结果示:过表达β-synuclein对大鼠海马神经元突起生长具有促进作用,干扰β-synuclein表达具有抑制作用;6)成功建立了L-谷氨酸钠诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的模型;7)成功构建了过表达β-synuclein的SH-SY5Y细胞,加入L-谷氨酸钠诱导SH-SY5Y细胞发生氧化应激损伤,用CCK-8试剂检测细胞存活率结果示:过表达β-synuclein能够提高L-谷氨酸钠诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的细胞存活率,能够减轻L-谷氨酸钠诱导SH-SY5Y细胞的氧化应激损伤。结论1)β-synuclein在SD大鼠脊髓损伤中的表达量下调,脊髓损伤程度越重,下调越明显。2)β-synuclein对大鼠海马神经元突起的生长具有促进作用。3)β-synuclein能够减轻L-谷氨酸钠诱导的细胞氧化应激损伤。
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