论文部分内容阅读
背景与目的:视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,RB)是婴幼儿中最常见的眼内恶性肿瘤,发病率约为1:15000至1:28000,其死亡率约为5%[1]。引起患者死亡的主要原因是肿瘤的侵袭与转移。而肿瘤的生长、侵袭、转移都依赖于肿瘤新生血管的生成。血管生成对实体瘤的快速生长和转移非常重要,是肿瘤研究的热点。研究表明,在肿瘤血管生长过程中,血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)起着重要的作用。胎盘生长因子(placenta growth factor,PIGF)系VEGF家族新成员,已发现在一些肿瘤中有不同程度的表达,但对视网膜母细胞瘤的研究相对缺乏资料,本试验通过对视网膜母细胞瘤的VEGF、PIGF的表达研究,探讨VEGF、PIGF在视网膜母细胞瘤组织的表达水平之间的相关性,以进一步明确视网膜母细胞瘤预后影响因素,指导临床治疗,提高患者生存率。材料及方法:1.材料收集沈阳军区总医院和中国医科大学附属一院病理科1965~2005年的RB标本30例,年龄从6月到6岁不等,其中男18例,女12例。所选蜡块重新切片,HE染色及形态学复习。2.方法免疫组化方法:P1GF多克隆抗体购自美国SantaCruz公司,CD34、VEGF单克隆抗体均由上海长岛试剂公司提供,采用链霉菌抗生物素蛋白一氧化物酶连接法(Streptavidin/Peroxidase,SP)按常规步骤进行,除—抗分别为CD34、VEGF、P1GF外,其余步骤均相同。阴性对照采用0.01MPBS液体代替一抗,其他步骤不变,阳性对照采用内对照。3.结果判定3.1肿瘤微血管密度(MVD)判断标准:CD34标记微血管,计算肿瘤内着色的毛细血管和微小血管。按照Weidner[2]的评判标准,凡呈现棕色单个内皮细胞或内皮细胞簇均作为1个血管计,但肌层较厚及管腔面积大于8个红细胞直径的血管不计数。计数方法:在200倍视野下计数每个视野内CD34阳性血管数,每例随机选择4个不重复的视野进行计数,求出平均值,计算每例单位视野内平均血管数,即为该例肿瘤的微血管密度(microvessel-density,MVD)值(个/X200).3.2 VEGF、PIGF判断标准:VEGF与PIGF均在以细胞浆呈现棕黄色着色,CD34表达阳性为血管内皮细胞被染成黄褐色。3.3统计分析:数据统计应用SPSSll.5软件,采用X 2检验、t检验和Spearman等级相关分析。结果:VEGF在66.67%(20/30)的视网膜母细胞瘤组织表达。VEGF在有或无视神经浸润的视网膜母细胞瘤组织中均有不同程度的表达,两者之间差异性(P<0.05)。VEGF阳性的视网膜母细胞瘤组织MVD为36.2±2.4/ X200。VEGF阴性组织中MVD为21.1±3.2/ X200,两者比较有显著性差异(P<0.01)。PIGF阳性视网膜母细胞瘤组织MVD为33.1±2.4/ X200,PIGF阴性视网膜母细胞瘤组织为30.8±2.6/ X200,两者差异亦呈显著性(P<0.01)。视网膜母细胞瘤中PlGF、VEGF蛋白表达阳性率和MVD呈明显正相关。免疫组化检测结果发现,在30例视网膜母细胞瘤中,未分化型视网膜母细胞瘤MVD值与分化型视网膜母细胞瘤MVD差异亦显著性差异(P<0.01)。相关分析发现,在视网膜母细胞瘤中,VEGF表达与MVD值呈明显正相关(r=0.541,P<0.01),PIGF表达与MVD值亦呈明显正相关(r=0.392,P<0.01)。对比PIGF与VEGF在MVD的表达上有明显相关。结论:1、VEGF在二型视网膜母细胞瘤组织中均有不同程度的表达,两者有显著差异性。2、PIGF在二型视网膜母细胞瘤组织中均有不同程度的表达,两者有显著差异性。3、VEGF在有或无视神经浸润的视网膜母细胞瘤组织中均有不同程度的表达,两者有显著差异性。4、VEGF、PIGF在二型视网膜母细胞瘤,尤其是未分化型视网膜母细胞瘤血管生成中发挥协同作用,两者之间有相关性。这对于今后进一步应用抗血管新生药物治疗视网膜母细胞瘤,提高患者生存率提供了一条新途径。