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第一部分Keap1基因在肿瘤细胞中的表达目的：验证Keap1基因在肿瘤细胞中的表达方法：用实时荧光定量PCR的方法，测定在人胃癌及前列腺癌细胞中肿瘤抑制因子keap1基因的表达。结果：肿瘤抑制因子Keap1扩增结果专一；Real-time PCR的实验结果中，Keap1在人胃癌及前列腺癌细胞中ΔCt的值均小于12，说明Keap1在人胃癌及前列腺癌细胞中表达丰度较高；PCR产物电泳图中可见目的基因Keap1片段(240bp)。结论：肿瘤抑制因子Keap1在人胃癌及前列腺癌细胞中广泛表达且丰度为高，适合做干扰验证实验。第二部分RNAi慢病毒载体的构建与包装目的：构建RNAi慢病毒载体，小量包装后测定病毒滴度，确定四组重组慢病毒颗粒的感染复数值，为最佳效率靶点的筛选做准备。方法：根据GenBank上Keap1的mRNA序列，设计四个有效靶点，制备双链DNA Oligo(Keap1-shRNA)，利用基因重组技术克隆到GV115慢病毒表达载体，双酶切后鉴定克隆子。在脂质体的介导下将包装好的慢病毒载体GV115-Keap1-shRNA转染293T细胞，利用逐孔稀释滴度测定的方法收集病毒原液后测定病毒滴度。结果：DNA测序证明插入序列正确，成功构建RNAi慢病毒载体。重组慢病毒载体成功包装，收集病毒原液测定重组慢病毒颗粒的感染复数值为3E+8TU/mL。结论：RNAi慢病毒载体的成功构建是为后续实验提供了必须的实验工具，为下一步筛选最佳靶点的实验提供了理论基础和前期准备。第三部分有效RNAi载体的筛选目的：筛选最佳效率的靶点方法：用Real-Time PCR检测目的基因mRNA表达水平，数据分析后评价干扰水平，筛选最佳靶点。结果：Real-Time PCR结果得出，人前列腺癌PC3细胞中，与阴性对照组比较，KD1、KD2、KD3组Keap1基因干扰效率较高(P<0.01),KD4组Keap1基因干扰效率无统计学意义(P>0.05)，且KD2组Keap1基因干扰效率达到75%(P<0.05)。结论：确定KD2即Keap1-RNAi-2为最有效靶点。