【摘 要】
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CaSC1，即辣椒倍半萜环化酶，是辣椒醇（Capsidiol）植保素代谢过程中催化法尼基焦磷酸（FPP）合成5-epi-Aristolochene的一个关键酶，在辣椒倍半萜植保素合成中起重要的调节作用。CaSC1在紫外线的诱导作用下表达，但对其诱导表达的分子机制还不很清楚。本研究从辣椒基因组DNA中分离获得了CaSC1的相应启动子，并利用农杆菌介导的烟草叶片瞬间表达系统，通过deletion缺失突
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CaSC1，即辣椒倍半萜环化酶，是辣椒醇（Capsidiol）植保素代谢过程中催化法尼基焦磷酸（FPP）合成5-epi-Aristolochene的一个关键酶，在辣椒倍半萜植保素合成中起重要的调节作用。CaSC1在紫外线的诱导作用下表达，但对其诱导表达的分子机制还不很清楚。本研究从辣椒基因组DNA中分离获得了CaSC1的相应启动子，并利用农杆菌介导的烟草叶片瞬间表达系统，通过deletion缺失突变体分析进一步分析了该启动子对不同逆境的应答并分析了可能的顺式作用元件。主要研究如下：1)利用Genome-walking技术从辣椒基因组DNA中分离出CaSC1基因cDNA翻译起始密码子5’端上游-612bp序列，序列分析结果表明，在ATG上游-105至-97处含有TATA框（TATATAA），此外还在此区域中发现W-box, TCA应答元件和ABRE元件等多个参与逆境胁迫应答的相关顺式作用元件，表明所分离的区域是CaSC1基因的启动子区域。2)构建与GUS报告基因的表达载体，在烟草中瞬间表达结果表明所分离的CaSC1基因翻译起始密码子上游-612bp的DNA片段是一个完整的启动子区域，UV-B、SA和JA可诱导该片段驱动的GUS基因表达，与前人关于CaSC1基因转录受到UV-B、SA、JA处理诱导的结果一致。进一步构建5个缺失突变体及其与GUS报告基因的表达载体，通过在烟草中瞬间表达，结果表明CaSC1启动子应答UV-B照射的元件位于启动子-612bp至-543bp片段之间，应答SA的元件位于启动子-181bp至-127bp片段之间，应答JA的元件位于启动子-543bp至-336bp片段之间。3)通过基因枪轰击洋葱表皮瞬间表达分析发现，CaWRKY2、CaWRKY3和CaWRKY5三个转录因子都可以与CaSC1基因的启动子相结合并驱动下游GUS基因的表达，这三个基因分别在辣椒应答青枯病等病原菌防御反应中起正或负的调控作用，暗示CaSC1的转录表达可能分别受到上述3个基因的调控。
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