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一、不同螺旋手性节旋藻的RAPD多态性分析及差异DNA片段克隆
对藻丝本征螺旋手性为左手的钝顶节旋藻品系ZJU0101及其变直呈手中性的藻丝ZJU0101/S进行RAPD多态性分析，并对差异片段进行克隆、测序及生物信息学分析。主要结果如下，(1)1035组RAPD引物（包括单引物和双引物组合）中1029组引物能在ZJU0101和ZJU0101/S中有效扩增，其中11组引物的扩增产物在ZJU0101和ZJU0101/S间呈现出多态性，占有效引物组数的1.1％，表明同一藻株不同手性藻丝间的遗传背景很相近，但确存有差异。(2)在13条多态性显著的DNA片段CRRM-1～13中，CRRM-2和CRRM-6为左手螺旋藻丝ZJU0101所特有，其余均仅存在于手中性藻丝ZJU0101/S中。(3)对CRRM-1～13采用二次PCR法回收，并进行克隆与测序，所获序列在GenBank的登录号为HQ821396～HQ821408。CRRM-1与反转录作用相关;CRRM-2与环境压力的调控相关;CRRM-3与蛋白水解相关;CRRM-4、CRRM-6和CRRM-8与物质运输相关;CRRM-5和CRRM-13与信号转导有关;CRRM-10与物质代谢有关;CRRM-11与抗氧化应激相关;CRRM-12与DNA解旋相关;CRRM-7功能未知;CRRM-9为未知新序列。
二、基于RAPD多态性的节旋藻不同手性SCAR分子标记研究
利用Primer Premier5.0软件设计了CRRM-1～13对应的SCAR引物SCAR-1～13，长度为18～25 mer，并将SCAR-1～13在左手螺旋的钝顶节旋藻品系ZJU0101和其变直呈手中性的藻丝ZJU0101/S及其他品系藻丝中进行验证。主要结果如下:(1)SCAR-1～13中仅有SCAR-7在节旋藻藻丝ZJU0101和ZJU0101/S间保持了RAPD多态性。(2) SCAR-7在左手螺旋藻丝ZJU0103、ZJU0104、 ZJU0109/RH、ZJU0110、ZJU0112、ZJU0118、ZJU0102、ZJU0106、ZJU0107、 ZJU0108、ZJU0111、ZJU0114、ZJU0115、ZJU0116、ZJU0117、ZJU0101/R和ZJU0110/R中无扩增条带，而在与上述前6株左手螺旋藻丝对应的手中性藻丝ZJU0103/S、ZJU0104/S、ZJU0109/S、ZJU0110/S、ZJU0112/S和ZJU0118/S中均扩增出目标条带，显示SCAR-7为与钝顶节旋藻螺旋手性相关的分子标记。
(3) SCAR-7扩增产物的长度为296bp，反向70bp起有1个含起始密码子的不完整ORF，对应75个氨基酸，并含一个DUF1089 superfamily的结构域。
三、不同手性钝顶节旋藻的HIP多态性分析
为进一步研究节旋藻不同手性藻丝间的DNA差异，试用蓝藻特有的分子标记HIP(highly iterated palindromic)的5个引物HIP-AT、HIP-CA、HIP-GC、HIP-TC和HIP-TG对7株左手螺旋的钝顶节旋藻品系ZJU0101、ZJU0103、ZJU0104、ZJU0109/RH、ZJU0110、ZJU0112和ZJU0118及对应手中性藻丝ZJU0101/S、ZJU0103/S、ZJU0104/S、ZJU0109/S、ZJU0110/S、ZJU00112/S和ZJU00118/S进行扩增。主要结果如下，(1)5个HIP引物对上述14种钝顶节旋藻藻丝均可有效扩增。(2)7株品系两两间的Jaccard遗传相似系数在0.212～0.985之间，并被聚成两簇，即ClusterⅠ，ZJU0103、ZJU0104和ZJU0112及ClusterⅡ，ZJU0101、ZJU0109/RH、ZJU0110和ZJU0118，这与先前基于16SrRNA和ftsZ等的聚类结果基本一致，说明上述HIP技术能较好地展示节旋藻的DNA多态性。(3) HIP引物在左手螺旋藻丝和手中性藻丝间的扩增产物总体上无差异，即便HIP-TC在ZJU0110中的扩增产物比ZJU0110/S的多了一条500bp带，HIP-TG在ZJU0101中的扩增产物比ZJU0101/S的多了两条620 bp和580bp带，但这种差异在其它品系中没有共性，因而未能通过HIP技术获得节旋藻螺旋手性的相关分子标记。(4)结合本实验室多年的实验研究与生产实践，发现上述7株节旋藻刚好按其生产性状的优劣程度被分到ClusterⅠ与ClusterⅡ中，进一步研究表明HIP技术可用于鉴别钝顶节旋藻生产性状的优劣。