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目的:本研究旨在通过对新生12h内的小鼠分别进行侧脑室注射PBS、h U6-MCS-CBh-gc GFP-IRES-puromycin、h U6-Rb-shRNA-CBh-gc GFP-IRES-puromycin、p LVX-Tight-ArxshRNA-IRES-Zs Green-Neo、h U6-Rb-shRNA-CBh-gc GFP-IRESpuromycin+Ubi-Dlx2-3FLAG-CBh-gc GFP-IRES-puromycin,分析对海马中GABA能神经元的影响,探究在调控GABA能神经元发育过程中,Rb与Arx之间是否存在调控关系,Dlx2是否参与Rb、Arx之间的调控机制,为神经发育障碍（neurodevelopmental disorders,NDDs）、多动症、抑郁症、脑和其他中枢神经系统疾病提供新的治疗靶点。方法:利用Block-ITRNAi Designer软件设计出干扰小鼠Rb的干扰RNA序列Rb shRNA,将Rb shRNA基因片段两端加上限制性内切酶Age I和Eco RI,链接入载体GV493质粒中,产生干扰Rb表达的慢病毒载体质粒,命名为Lenti-Rb shRNA;干扰Arx表达的慢病毒载体质粒我们课题组前期已经制备,命名为Lenti-Arx shRNA;从Gene Bank中调取小鼠Dlx2 CDS序列,上游加Kozak序列,人工合成序列后链接入GV492质粒中,产生过表达Dlx2的慢病毒载体质粒,命名为Lenti-Dlx2;Lenti-CON为空载体质粒即不含有外源目的基因。将病毒包装辅助质粒Helper1.0、Helper2.0与相应的载体质粒共转染293T细胞,包装出慢病毒载体。实验分为五组:PBS组、CON组、Rb-shRNA组、Arx-shRNA组、Rb-shRNA+Dlx2组。对新生12h之内的小鼠进行侧脑室注射慢病毒载体,注射48h、72h、96h后通过RT-q PCR、Western Blot、免疫荧光方法检测各组Rb、Arx以及GABA能神经元表面标记物GAD65、GAD67的mRNA和蛋白表达变化。结果:1.成功合成慢病毒载体质粒Lenti-CON、Lenti-Rb shRNA、Lenti-Arx shRNA、及Lenti-Dlx2,并将载体质粒与慢病毒辅助包装质粒共转染293T细胞,成功包装出相应的慢病毒并测得滴度。2.对新生12h内的小鼠进行侧脑室注射慢病毒载体48h、72h及96h时,Rb、Arx、GAD65与GAD67的表达在PBS组与CON组之间无明显差异,说明慢病毒载体本身对实验结果没有影响。3.侧脑室注射慢病毒载体48h时,各组之间Rb、Arx、GAD65与GAD67的表达无明显差异,说明此时干扰Rb的小RNA序列、干扰Arx的小RNA序列和Dlx2过表达序列尚未发挥作用。4.侧脑室注射慢病毒载体72h及96h时,干扰Rb使Rb降低的同时,Arx的表达也降低,GAD65和GAD67的表达减少;干扰Arx对Rb的表达没有影响,但使GAD65和GAD67的表达减少;Lenti-Rb shRNA+Lenti-Dlx2组与Lenti-Rb shRNA组相比,使Arx的表达升高,GAD65和GAD67表达升高;Lenti-Rb shRNA+Lenti-Dlx2组与Lenti-Arx shRNA组相比,使Arx的表达升高,GAD65和GAD67的表达升高。结论:1.Rb、Arx基因对新生小鼠海马GABA能神经元的发育有正向调控作用。2.Dlx2基因能够挽救由Arx低表达导致的GABA能神经元发育异常。3.Rb通过Dlx2调控Arx的表达,进而影响新生小鼠海马GABA能神经元的发育。