【摘 要】
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目的:研究高血压心肌纤维化中miR-150-3p调控Wnt/β-catenin通路的机制及天麻钩藤饮的作用机理,为中医药防治高血压心肌纤维化寻找新的靶点。方法:第一部分:采用生物信息学方法,通过GEO数据库检索高血压心肌纤维化有关miRNA数据集,筛选出在高血压心肌纤维化中差异表达的miRNA,预测miR-150-3p靶基因进行信号通路分析。第二部分:临床验证高血压心肌纤维化患者血清miR-150
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目的:研究高血压心肌纤维化中miR-150-3p调控Wnt/β-catenin通路的机制及天麻钩藤饮的作用机理,为中医药防治高血压心肌纤维化寻找新的靶点。方法:第一部分:采用生物信息学方法,通过GEO数据库检索高血压心肌纤维化有关miRNA数据集,筛选出在高血压心肌纤维化中差异表达的miRNA,预测miR-150-3p靶基因进行信号通路分析。第二部分:临床验证高血压心肌纤维化患者血清miR-150-3p表达情况。收集符合纳入标准的高血压患者及健康志愿者血清进行miR-150-3p表达检测,比较miR-150-3p在高血压心肌纤维化患者与健康志愿者中的表达情况。第三部分:高血压心肌纤维化机的制研究。采用瞬时转染法将miR-150-3p模拟物及抑制物转染至心肌成纤维细胞,RT-PCR法检测miR-150-3p表达情况;CCK8法检测细胞增殖情况;ELISA法检测细胞培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原及α-SMA蛋白表达情况;western-blot法检测β-catenin表达情况,以明确高血压心肌纤维化中miR-150-3p调控Wnt/β-catenin信号通路的机制。第四部分:天麻钩藤饮防治高血压心肌纤维化的机制研究。采用TGF-β1刺激心肌成纤维细胞制造高血压心肌纤维化模型,清洁SD大鼠灌胃制备含药血清,分组干预心肌纤维化模型。RT-PCR法检测miR-150-3p表达情况;CCK8法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原及α-SMA表达情况,western blot法检测β-catenin表达情况以探讨天麻钩藤饮含药血清对心肌纤维化及wnt/β-catenin通路的影响。结果:1、生物信息学分析:miR-150-3p在高血压患者及慢性心力衰竭合并心肌纤维化患者血清中均差异性表达,经靶基因KEGG通路富集分析发现其与Wnt/β-catenin通路密切相关。2、高血压心肌纤维化患者与健康对照组相比,血清Ⅰ、Ⅲ胶原及α-SMA表达升高,结果具有统计学意义（P<0.05）;高血压心肌纤维化患者与健康对照组相比血清miR-150-3p表达量较健康对照下调,结果具有统计学意义（P<0.05）。3、miR-150-3p模拟物及抑制物转染细胞后,抑制物组较对照组及模拟物组相比,细胞增殖水平升高,Ⅰ、Ⅲ胶原及α-SMA蛋白表达升高,β-catenin表达升高,结果具有统计学意义（P<0.05）。4、与对照组相比,模型组miR-150-3p表达下降,心肌成纤维细胞的增殖水平升高,Ⅰ、Ⅲ胶原和α-SMA蛋白的分泌增多,β-catenin的表达升高,结果具有统计学意义（P<0.05）;与模型+SD组相比,模型+中药组miR-150-3p表达量升高,Ⅰ、Ⅲ胶原和α-SMA蛋白的分泌减少,β-catenin的表达下调,结果具有统计学意义（P<0.05）。结论:1、miR-150-3p在高血压心肌纤维化患者中表达下调;2、抑制miR-150-3p表达能上调β-catenin表达导致心肌成纤维细胞激活;3、天麻钩藤饮含药血清可能通过上调miR-150-3p抑制Wnt/β-catenin通路防治高血压心肌纤维化。
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