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背景:非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除酒精、乙肝等其他明确因素外,以镜下可见弥漫性肝细胞大泡性脂肪变性,伴炎性细胞浸润为主要病理特征的一类疾病。我国患病人数呈现出逐年增长的态势,且年轻化趋势明显,不完全统计成年人中NAFLD患病率不低于30%,而在肥胖和糖尿病群体中的患病率甚至高达70%-80%。NAFLD全球患病率的上升与肥胖、糖尿病和代谢综合征的发病率上升正相关。最终有可能会发展成肝硬化、肝癌,将给个人和社会带来极大的负担。肝脏是体内脂肪合成与储存的重要器官,也承担着运输、代谢脂肪组织的重要功能,出现现任何障碍都会造成脂肪在肝细胞内过量积聚,形成脂肪肝。脂肪组织的过度增加促进了体内饱和脂肪酸对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4)的激活,介导肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)通过死亡受体信号通路引导慢性炎症发生、参与多种病理过程,其体内下游信号通路TRAF3可使TAK1泛素化后出现自磷酸化,激活NF-κB炎症通路,对非酒精性脂肪肝病的炎性病变发生起重要作用。苓桂术甘汤是中国传统医学常用的祛湿剂,具有温阳、祛湿、化痰、健脾之功效。善治脾阳不足所致的痰饮证。临床常用于治疗各种病因病机导致的水饮停于中焦者。本研究在前期研究的基础上,以TLR4/TNF-α/NF-κB信号通路为靶点,拟通过动物实验探讨加味苓桂术甘汤调节炎症反应发生发展的作用机制。目的:研究加味苓桂术甘汤对大鼠肝脏细胞脂代谢、炎症反应的影响及机制研究。方法:实验鼠由湖北省实验动物研究中心购买,8-10周龄、体重300-350g的雄性winstar大鼠。实验分组:实验鼠随机分成五组,每组10只,分别为:①对照组:正常饮食、灌注生理盐水;②模型组:高脂饮食诱导NAFLD、灌注生理盐水;③低剂量组:高脂饮食诱导NAFLD、灌注低剂量加味苓桂术甘汤处理;④中剂量组:高脂饮食诱导NAFLD、灌注中剂量加味苓桂术甘汤处理;⑤高剂量组:高脂饮食诱导NAFLD、灌注高剂量加味苓桂术甘汤处理,实验模型建立:拟采用高脂饮食(脂肪提供的能量占总能量的60%)。建模与干预治疗:持续高脂饮食喂养12周,建立高脂饮食诱导的肥胖大鼠模型;加味苓桂术甘汤干预造模鼠8周。五组大鼠均于造模8周后颈动脉取血,组织取样,进行实验检测。主要采用单因素方差分析及t检验进行分析。以P<0.05表示差异具有统计学意义。结果:(1)观察各组大鼠发现,模型组整体体重水平明显高于正常组,精神欠佳,反应迟钝,饮水量大,进食量少,体毛杂乱、毛色发黄,大便呈糊状,粘性大。肝脏体积大而圆钝,表面粗糙,抚摸有颗粒感,被膜紧绷,质硬,呈黄褐色,可见黄色斑点,与正常组相比有明显区别。加味苓桂术甘汤各剂量组在体重体态、活动性、肝脏质地等各方面均不同程度优于模型组。(2)肝指数、血清生化指标显示:各剂量中药组大鼠肝指数、血清TC、TG、LDL水平较模型组大鼠均明显降低,有显著性差异(P<0.05)。(3)肝组织HE染色结果:模型组肝细胞组织有明显病理性特征:肝小叶结构破坏:细胞排列紊乱,放射状排列消失:视野中大量大小不等、边界清晰的脂滴空泡,散在坏死的无核肝细胞,同时可见不均匀炎性浸润。治疗组(低、中、高剂量治疗组)肝细胞组织结构改变、脂肪变性与炎性浸润均较模型组有不同程度的改善。(4)Westenblot结果:与正常组对比,模型组大鼠TRAF-3、NF-κB(p65/P-p65)表达量均不同程度升高,相互间有统计学差异(P<0.05);治疗组(低、中、高剂量)于模型组比较,上述指标均明显降低,相互间有统计学差异(P<0.01)。与正常组对比,模型组大鼠TLR4表达量明显升高,有统计学差异(P<0.05);治疗组中,高剂量组于模型组比较,表达量明显降低,相互间有统计学差异(P<0.01),低、中剂量组于模型组比较,表达量变化无统计学差异(P>0.05)。(5)RT-qPCR检测结果:大鼠肝脏组织中,脂代谢因子(SREBP、Leptin)、炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-10、IL-12)的表达水平模型组与正常组进行组间对比,模型组远高于正常组,具有显著的差异(P<0.05);治疗组(低、中、高剂量)大鼠肝脏组织中脂代谢因子(SREBP、Leptin)、炎症因子(TNF-α、IL-lβ、IL-10、IL-12)的表达水平分别与模型组进行组间两两对比,各剂量组均低于模型组,除低剂量组TNF-α mRNA相对表达量无统计学意义,其余各组间对比具有显著的差异(P<0.05)。结论:(1)加味苓桂术甘汤能改善非酒精性脂肪肝病大鼠的一般状况,调节脂代谢紊乱状态,减少肝细胞损伤、脂肪变性及炎症浸润状态。具有改善脂代谢,保护肝脏的作用。(2)加味苓桂术甘汤可明显降低大鼠肝组织中TRAF-3、NF-κB(p65/P-p65)、TLR4通路及相关蛋白表达水平以及脂代谢、炎症因子(白细胞介素)等基因的表达。(3)加味苓桂术甘汤通过减少大鼠肝脏内脂肪沉积,改善肝脏细胞脂肪变程度及炎症浸润状态;降脂、抗炎、护肝,展现出对非酒精性脂肪肝病具有良好的治疗作用。