论文部分内容阅读
植物是生物活性化合物的天然宝库,从植物中寻找天然活性物质,直接加工成农药来控制有害生物的为害或作为先导化合物进行结构优化合成新型农药,是目前植物源农药研究的热点之一。石榴皮作为一种传统的中药,其在医药和临床医学上的应用研究比较广泛,而在农用杀虫抑菌剂方面研究较少。本文对石榴皮提取物的农用抑菌活性及应用进行了初步研究;以黄瓜枯萎病菌为指示菌,从提取温度、提取时间等方面优化了石榴皮活性物质的提取工艺;同时采用活性追踪方法对其抑菌活性物质进行了分离纯化。取得了如下研究结果:1.室内生物活性测定结果表明:不同极性溶剂的石榴皮提取物对黄瓜枯萎病菌均有一定程度的抑制作用,但活性大小存在差异,表现为溶剂极性越大,活性越强。浓度100g/L时,甲醇提取物对黄瓜枯萎病的抑菌率为82.75%,三氯甲烷和乙酸乙酯提取物其次,抑菌率分别为75.31%和71.63%;正己烷和石油醚提取物的抑菌活性稍低,抑菌率分别为62.53%和61.93%。经DPS软件进行数据处理和分析,得甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、正己烷和石油醚提取物的EC50分别为15.73g/L、22.32g/L、34.68g/L、54.27g/L和37.91g/L。2.在单因素实验的基础上,采用正交法试验设计,以黄瓜枯萎菌为指示菌,优化出最佳提取条件为:料液比(W:V)1:20、甲醇浓度70%(V:V)、提取温度45℃、提取时间30min、提取3次。在此工艺条件下,石榴皮提取物对黄瓜枯萎病的抑制率可达到68.55%。3.采用活性追踪和化学分离相结合的方法,对石榴皮提取物中的抑菌活性成分进行了研究。用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇对石榴皮甲醇提取物进行连续等量萃取,生物活性测定结果表明,正丁醇萃取物的抑菌活性较强,对玉米小斑、番茄灰霉、黄瓜枯萎和棉花立枯4种病原菌均具有较高的抑菌生物活性,200g/L时抑制率均大于70%,对玉米小斑病菌的抑制作用则可达到90.67%,EC50值为26.2g/L。采用TLC和柱层析法对正丁醇萃取物作进一步的分离并对各馏分进行了生物活性测定,结果表明:馏分PGP10、PGP15和PGP7’活性最强,对其进一步进行了LC-MS和GC—MS测定,表明馏分中有效成分可能是醇、烯、酯、酚和伪石榴皮碱。4.通过对溶剂系统和乳化剂等进行筛选,配制得到25%石榴皮浸膏水剂,并对该制剂进行了温室盆栽药效试验。结果表明,25%石榴皮浸膏水剂对玉米小斑病、黄瓜枯萎病和番茄灰霉病均有一定程度的防治效果。在稀释100倍液时,25%石榴皮浸膏水剂对玉米小斑病的防效为86.62%,高于化学药剂对照多菌灵300倍液;对黄瓜枯萎病和番茄灰霉病的防效分别为73.01%,和化学药剂对照多菌灵300倍液处于同一显著水平,对番茄灰霉病的防效为77.28%,和化学药剂对照甲基托布津300倍液处于同一显著水平。