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第一部分EGFL7在人胰腺癌细胞株中的表达目的研究Patu8988、PANC-1、Bx PC-3、Capan-1胰腺癌细胞EGFL7的表达状况,为后续研究做好准备。方法常规培养Patu8988、PANC-1、Bx PC-3、Capan-1胰腺癌细胞,Real-time PCR、Western blot方法检测EGFL7 m RNA和蛋白的表达。结果Real-time PCR显示上述4株胰腺癌细胞中EGFL7 m RNA相对量分别为:1.73±0.15、2.26±0.20、1.53±0.10、1.00±0.10,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot显示上述4株胰腺癌细胞中EGFL7蛋白相对量分别为:0.26±0.03、0.32±0.04、0.23±0.02、0.15±0.02,差异有统计学意义(P<0.05),其中PACN-1细胞的EGFL7表达量最高。结论在Patu8988、PANC-1、Bx PC-3、Capan-1胰腺癌细胞中,PANC-1细胞EGFL7表达量最高。第二部分靶向EGFL7的si RNA干扰质粒的构建与筛选目的构建并筛选靶向EGFL7沉默效果最佳的si RNA干扰质粒。方法根据Gen Bank中EGFL7的基因序列,设计4条靶向人EGFL7的si RNA序列,与干扰载体共转染PANC-1细胞,Real-time PCR、Western blot筛选出最佳干扰序列。结果靶向EGFL7基因重组si RNA干扰质粒构建成功,并能有效抑制EGFL7的表达,且EGFL7-si RNA-1效果最佳。结论EGFL7-si RNA-1干扰质粒对PANC-1细胞EGFL7的沉默效果最佳。第三部分EGFL7对胰腺癌PANC-1细胞侵袭的影响及机制探讨.目的研究EGFL7靶向沉默后人胰腺癌PANC-1细胞侵袭能力的改变,及EMT相关标志物表达的改变。方法实验细胞分为PANC-1(空白对照组)、NC-PANC-1(阴性对照组)、si-PANC-1(实验组)三组。各组细胞连续培养120h,分别在转染24h、48h、72h、96h、120h后MTT法检测增殖活性。转染后72h,Transwell检测各组细胞的侵袭能力。Real-time PCR、Western blot检测E-Cadherin、N-Cadherin、Fibronectin、Vimentin m RNA和蛋白的表达。结果MTT实验显示,转染24h、48h、72h、96h、120h后3组细胞的增殖活性差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell侵袭实验显示,转染后72小时3组的侵袭细胞数分别为79±5.0、70.2±4.0、30±2.5,差异有统计学意义(P<0.05)。Real-time PCR和Western blot显示:si-PANC-1组E-Cadherin m RNA及蛋白较其他两组显著升高(P<0.05),而NCadherin、Fibronectin、Vimentin较其他两组显著降低(P<0.05);NC-PANC-1组与PANC-1组间E-Cadherin、N-Cadherin、Fibronectin、Vimentin m RNA及蛋白差异无统计学意义(P>0.05)。结论EGFL7可通过EMT过程促进胰腺癌的侵袭。