随着人类对海洋资源的不断开发和利用,海洋的环境污染问题便随之而来。海洋污染物主要有重金属、农药、有机物等,其中农药本身具有富集性、降解难、残留高的特点,并可通过径流、雨水冲刷等途径进入海洋,是海洋重要污染物之一。大多数农药为环境雌激素,在机体内,农药的内分泌影响多为模拟雌激素的生理功能,从而对生物体内的雌激素水平产生干扰效应,影响器官的发育及正常的激素代谢。海带及羊栖菜在人类生产、生活中占有重要地位。由于其营养均衡、口感佳、并具有一定的医疗保健作用,人们对其消耗量日益增大。目前,对于海水、海底沉积物和海洋动物(贝类、鱼类、虾类等)中环境激素类污染物的研究很多,但对海带及羊栖菜中的研究较少。本课题选取海带、羊栖菜为研究对象,对其残留农药的拟雌激素活性进行研究分析。乳腺癌MCF-7细胞是雌激素实验中选取的经典细胞株,具有雌激素敏感特性;睾丸支持细胞为生精细胞提供营养和支持,对睾丸的功能和发育起到至关重要的作用,任何损伤支持细胞的外源物质都会产生雄性生殖毒性;颗粒细胞为卵母细胞提供了营养和支持,对卵巢的功能和发育也有至关重要的作用,任何损伤卵巢颗粒细胞的物质都将会产生雌性生殖毒性。所以本实验选取乳腺癌MCF-7细胞、睾丸支持细胞、卵巢颗粒细胞为研究对象,对海带及羊栖菜中残留的农药提取物对细胞的毒性作用进行比较。本实验采用混合酶液(胶原酶和胰酶)消化提取小鼠睾丸支持细胞,离子螯合剂乙二胺二乙酸(EDTA)和胰酶混合酶液消化提取卵巢颗粒细胞,分离所得的细胞再采用倒置显微镜、HE染色法、蛋白免疫化学法进行鉴定。通过MTT法比较海带、羊栖菜中残留的农药对MCF-7细胞、小鼠生殖细胞(睾丸支持细胞、卵巢颗粒细胞)的影响;采用Western blot法检测海带及羊栖菜中残留的农药提取物对MCF-7细胞、支持细胞、颗粒细胞内MAPK信号转导通路上相关蛋白ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达分布的影响。本实验提取的睾丸支持细胞、卵巢颗粒细胞后,采用倒置显微镜法、HE染色法、蛋白免疫化学法对所提取的细胞进行鉴定,结果显示细胞纯度可达80%以上。MTT结果显示,海带、羊栖菜中残留农药提取物对MCF-7细胞、支持细胞、颗粒细胞在24h、48h、72h时均有增殖作用,48h增殖效果最明显与阴性对照组比较有差异性(P<0.05)。Western Blot法结果显示,海带、羊栖菜农药提取物作用于MCF-7细胞、睾丸支持细胞、48h后,阳性药雌二醇(E2)、提取物可以促进MCF-7细胞、睾丸支持细胞、卵巢颗粒细胞内ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达,与阴性对照组比较有差异性(P<0.05)。上述结果表明,海带、羊栖菜中残留农药提取物可产生拟雌激素活性作用。