研究目的追溯第五批全国老中医专家吴生元教授学术思想形成渊源,学习吴氏流派的学术思想,总结、传承吴生元教授辨治痛风的学术经验;研究导师治疗痛风验方加味竹叶石膏汤抗炎作用机制,为挖掘和发挥中医药治疗本病的优势奠定临床、理论和实验基础。同时从实验研究出发,佐证吴生元教授的学术思想运用于临床有效的机制。研究方法主要采用两种研究方法:其一运用中医文献整理研究及临证跟师学习方法,即“学经典、跟名师、做临床”;其二采用细胞免疫、分子生物学和病理学等方法进行加味竹叶石膏汤的实验研究。研究内容第一部分学习总结吴生元教授的学术思想及辨治痛风的学术经验加强对中医经典及对古代医家,如李中梓、陈修园、郑钦安、吴佩衡等医家的学习,梳理其中的学术传承脉络,更加深刻的理解吴氏学术流派特色,有利于继承该流派的学术思想;跟师学习导师的临证经验,归纳导师辨治痛风的学术经验。第二部分加味竹叶石膏汤抗炎作用及机制研究在研课题“加味竹叶石膏汤介导IL-1β信号通路抑制痛风性关节炎的机制研究”(云南省科技厅项目,编号:2011FZ262),检测加味竹叶石膏汤对尿酸钠结晶诱导小鼠腹膜炎模型、痛风性关节炎模型及单核细胞模型的抗炎作用,以发现加味竹叶石膏汤介导IL-1信号通路可能的调控机制。研究结论第一部分吴生元教授辨治痛风的学术思想吴生元教授传承并发扬创新吴氏流派学术思想,深研中医经典,形成自己的学术思想,具有丰富的临证经验,擅用经方治病疗疾;治病必求于本,扶正以达祛邪为要;重视中医临床科研,中西医研究并重;导师对痛风诊疗具有独特的辨治经验。1吴氏学术流派形成脉络追溯近代医家李中梓、陈修园、郑钦安、吴佩衡等各位医家的学术思想,均来源于《黄帝内经》《伤寒论》等,既有继承,又有创新。生理上重视阴阳、水火的关系,“阴阳以平为期”,水火之机在于互济;病理上认为如果不能维持“阴平阳秘”的动态平衡,“阴阳离决”就是“阴症阳症的由来”。治疗首重阳气,养阳在滋阴之上,但也遵循辨证论治原则,不忘“存津液”,治以养阴以制阳;热证伤阴当养阴清热,当用则用。2吴生元教授辨治痛风的学术经验2.1痛风病因病机分析吴生元教授认为痛风病因病机主要有三点:第一湿热与阴虚同病。多由阴液亏虚或运行受阻,阴液亏虚易生热,至阴虚火旺,更灼伤津液或敛液成痰;或津液运行受阻不化而成湿。痰湿本属代谢产物,互结为患,成为致病因素,瘀阻关节而致痛风发作;久而瘀聚不化形成痛风石。外证多由湿邪为患,郁久化热,形成湿热之邪,痹阻经络关节,气血阻滞,不通则痛,发为痛风。第二长期进食膏梁厚味、嗜酒之人,易生湿热之邪而发痛风。湿阻中焦,易寒邪内生,寒湿阻滞日久,湿易生痰,寒易生瘀,痰瘀互结为患;湿聚日久化热,湿热流注四肢,引动痰瘀伏邪,闭阻经脉,气血不通而发为痛风,故辨证为内寒外热证。第三先天禀赋不足,肝肾亏虚,精血不足,则筋骨经脉失养;或外证当内舍于脏腑,痛风日久当损及肝脾肾,肝脾肾病也会引发痛风发作。阴虚表现为肝肾亏虚;阳虚表现为脾肾阳虚,影响气血津液运化,致痛风反复发作。2.2痛风辨证论治吴生元教授分期辨证论治:(1)急性期分为湿热蕴结、内寒外热证;(2)间歇期(脾虚湿阻证)为主;(3)慢性期分为寒湿痹阻证、痰瘀痹阻证、肝肾亏虚证、脾肾阳虚证。导师辨治痛风特色分析:(1)独创内寒外热证,表现为关节疼痛,局部触之发热,全身热象不显,或反自觉畏寒,喜热饮等。治以寒热分消,内外合治。内治散寒除湿,温通经络;外用清热解毒、散结消肿。内服黄芪防己汤,外用苦参黄柏汤泡洗(制成院内制剂“痛风消颗粒剂及痛风清洗剂组合剂”内服与外洗,临床运用10余年)。导师2001年亲自进行了中药“痛风消”组合剂的主要药效学试验,证明其有效性和安全性。(2)湿热蕴结证,实际包含湿热与阴虚并存之机,治以清热除湿、养阴通络,方选加味竹叶石膏汤,为清湿热与养阴津并行之方,标本同治,祛邪不伤正,扶正不助邪,理法方药贯穿一线,为导师独创治法;前期开展了较多临床观察研究,证明确有疗效,在此基础上,开展实验研究,从分子生物学进一步深入研究其可能机制。慢性期分脾肾阳虚证,肝肾亏虚证,体现了导师治病必求于本的学术思想。第二部分加味竹叶石膏汤抗炎作用及机制研究实验一1.小鼠痛风性关节炎模型组血清il-1β、caspase-1明显升高;与模型组比较,加味竹叶石膏汤组小鼠血清中il-1β、caspase-1均有降低(p﹤0.05),同时,加味竹叶石膏汤可不同程度降低小鼠痛风性关节炎症指数,病理结果显示其能减轻炎性细胞浸润,明显改善小鼠关节炎症状。2.小鼠腹膜炎模型组血清il-1β、caspase-1明显升高;与模型组比较,加味竹叶石膏汤组高、中、低剂量组小鼠血清中il-1β、caspase-1均有降低(p﹤0.05),与阳性药秋水仙碱组比较,加味竹叶石膏汤高剂量组小鼠血清il-1β、caspase-1亦有降低(p﹤0.05)。实验二1.经加味竹叶石膏汤含药血清干预thp-1细胞最适浓度分析,10%加味竹叶石膏汤含药血清浓度为适宜浓度,可用于后续蛋白表达分析。2.westernblot检测,与相同浓度的正常对照组相比较,加味竹叶石膏汤含药血清中、高剂量组显著下调pro-il-1和pro-caspase-1蛋白表达水平。3.elisa法检测,与正常对照组比较,模型组单核细胞il-1、il-18浓度明显增加;加味竹叶石膏汤组含药血清干预后,il-1、il-18浓度有下降趋势。与模型组比较,加味竹叶石膏汤高剂量组il-1、il-18明显下降(p﹤0.05)。通过实验研究,揭示了加味竹叶石膏汤可能通过下调白介素相关炎症因子,介导白介素信号通路参与该模型的炎症演变过程,填补该方药实验研究的空白,为治疗痛风提供理论依据,丰富中医药防治痛风理论。