【摘 要】
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木质素（Lignin）存在于植物细胞壁,具有增强细胞壁硬度,抵御病菌感染等生物学功能,但同时存在于牧草中的木质素则影响牲畜对纤维素的消化和吸收,降低牧草的饲用价值。柱花草（Stylosanthes guianensis SW）是我国南方重要的豆科牧草,降低柱花草木质素的含量可以提高柱花草的饲用价值。木质素的生物合成是以苯丙氨酸为前体,在多种酶的催化作用下经过甲基化,羟基化以及还原等反应生成木质素单
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木质素（Lignin）存在于植物细胞壁,具有增强细胞壁硬度,抵御病菌感染等生物学功能,但同时存在于牧草中的木质素则影响牲畜对纤维素的消化和吸收,降低牧草的饲用价值。柱花草（Stylosanthes guianensis SW）是我国南方重要的豆科牧草,降低柱花草木质素的含量可以提高柱花草的饲用价值。木质素的生物合成是以苯丙氨酸为前体,在多种酶的催化作用下经过甲基化,羟基化以及还原等反应生成木质素单体的复杂过程。本研究选取影响木质素生物合成的3个关键酶基因（CCo AOMT、COMT和CAD）为对象,利用RNAi技术,构建相应的RNAi载体,通过农杆菌介导侵染柱花草,以获得木质素含量降低的转基因柱花草。本文获得的主要结果如下:1.选取成熟柱花草植株从上向下第2、4、6、8片四个不同位置时期的柱花草叶片,测定木质素含量和Sg CCo AOMT、Sg COMT和Sg CAD的表达量,发现随着叶片的成熟,木质素的含量呈现逐渐上升的趋势,Sg CCo AOMT、Sg COMT的表达量都是随着叶片的成熟而呈现先上升后逐渐下降的趋势,而Sg CAD的表达量是先上升后下降再趋于稳定的趋势。结果表明,Sg CAD、Sg COMT、Sg CCo AOMT基因可能参与柱花草木质素生物合成。2.克隆了柱花草Sg CCo AOMT、Sg COMT和Sg CAD等基因的编码序列,并成功构建了含有Basta筛选标记基因的RNAi载体,并将其成功转入农杆菌EHA105中。通过农杆菌介导的遗传转化体系,获得了再生植株。3.对再生植株进行Basta筛选,PCR检测,最终得到了6株来自不同愈伤的含有Bar基因干涉Sg CCo AOMT的阳性转基因植株、3株来自不同愈伤的含有Bar基因干涉Sg COMT的阳性转基因植株和4株来自不同愈伤的含有Bar基因干涉Sg CAD的阳性转基因植株。综上所述,通过构建Sg CCo AOMT、Sg COMT和Sg CAD的RNAi载体并得到阳性转基因植株,为进一步培育低木质素含量的柱花草奠定了基础。
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