菜籽肽的制备、分离纯化及其抗氧化活性研究

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本文以高温菜籽饼粕为原料,采用超声-微波协同萃取仪提取菜籽蛋白,然后用碱性蛋白酶Protex6L对菜籽蛋白进行可控水解,制备抗氧化菜籽肽,并通过Sephadex G-15葡聚糖凝胶分离纯化菜籽肽,最后对菜籽肽及其各分离组分进行抗氧化性能研究。试验获得的主要结论如下:(1)以高温菜籽饼粕为原料,以蛋白提取率为指标,采用单因素和响应曲面试验方法,研究超声-微波协同提取蛋白的最佳工艺条件。结果表明:微波功率、pH、提取时间和液料比四个单因素对蛋白提取率的影响极显著,微波功率和提取时间的交互作用显著,提取时间和液料比的交互作用显著:超声-微波协同提取菜籽蛋白的最佳提取条件:菜籽饼粕为60目,液料比为20:1,超声波频率为40KHz、功率为50w,微波功率为80w,pH为12,提取时间为500s,提取3次;蛋白的提取率为90.54%,提取时间为8min,比传统水相萃取法提高7.79%,提取时间缩短5倍。(2)以水解度和酶解物的抗氧化值为指标,对碱性蛋白酶Protex6L、中性蛋白酶Protex7L、Protamex、Alcalase2.4L、复合风味蛋白酶Flavourzyme五种蛋白酶进行筛选,然后用最佳蛋白酶水解菜籽蛋白,通过单因素和D-optimal试验优化最佳酶解条件。结果表明:碱性蛋白酶Protex6L为最佳用酶、加酶量为5430U/ml、pH10、温度55℃、底物浓度2%、酶解时间2h,在该条件下酶解产物的抗氧化值为33.64mmol trolox/100g,水解度为15.88%。(3)以水作为洗脱液,用Sephadex G-15葡聚糖凝胶分离纯化多肽,得3个组分(RⅠ、 RⅡ、RⅢ),经高效液相色谱法测定各组分的相对分子质量依次约为:365,300,120,通过测定对超氧阴离子自由基、羟自由基、ABTS自由基、DPPH自由基的清除能力以及其还原力五个抗氧化指标来探讨菜籽肽及其组分的抗氧化能力。结果表明:多肽及其组分具有较强的抗氧化活性,组分RⅢ的抗氧化活性明显高于组分RⅠ、RⅡ肽,其中对羟自由基清除能力最强,组分RⅢ的活性甚至高于同浓度的Vc;多肽的抗氧化活性与其相对分子质量大小呈反比,相对分子质量越小,其抗氧化活性越强,RⅢ组分的相对分子质量最小,抗氧化活性最强。
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