外膜蛋白F（OmpF）是大肠杆菌重要的外膜蛋白之一，孔径为1nm，许多营养物质和β-内酰胺类抗生素大多经过此通道扩散入菌体内。β-内酰胺类抗生素作用的靶分子是位于细菌细胞膜上的青霉素结合蛋白（PBPs），革兰氏阴性菌对β-内酰胺类耐药性主要与β-内酰胺酶的产生和外膜的存在有关。细菌膜孔蛋白表达量降低或者缺失将会造成细菌对β-内酞胺类抗生素产生耐药性，基因敲除技术是研究基因功能的重要手段。为研究OmpF基因在大肠杆菌对β-内酰胺类耐药中的作用，本试验利用λ噬菌体RED重组系统对本实验室保存的大肠杆菌菌株构建OmpF基因缺失株，并通过PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳、测序等方法对缺失株进行鉴定，成功构建了OmpF基因缺失株。运用药敏实验和MIC实验检测比较大肠杆菌亲本株与基因OmpF缺失株对β-内酰胺类中几种抗生素的耐药性，从而了解OmpF与β-内酰胺类抗生素耐药关系。结果显示：在本实验中成功构建了OmpF基因缺失株，在对亲本株与基因缺失株做耐药性检测发现，药敏试验中亲本株对CZ，CFP，AMP，MPN，IPM，CRO，CAZ，VI都敏感；而缺失株对CZ，MPN，AMP，CAZ为中介，对CFP，CRO，VI为耐药，对IPM敏感但是抑菌圈明显减小；MIC实验中亲本株对β-内酰胺类抗生素：CZ，CFP，AMP，CRO，CAZ和CTX都敏感，而缺失株对CZ，CAZ为中介，对CFP，AMP，CRO，CTX为耐药。亲本株对CRO敏感性比缺失株高约64倍。结果表明：在大肠杆菌中OmpF基因缺失株与亲本株做耐药性比较，OmpF基因缺失株对β-内酰胺类几种抗生素耐药性有不同程度的增强。