微囊化和基因修饰的肝细胞移植研究——人肝再生增强因子(hALR)的真核表达及部分生物学活性研究

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目的:为研究人肝再生增强因子对真核细胞生长的影响及其表达产物的生物学活性,构建pEGFP-C<,1>-hALR真核表达质粒并导入LO2肝细胞中,建立稳定表达的细胞克隆,从而为建立单基因和多基因修饰的移植用工程细胞株提供了可能的方法,为研究多种生长因子之间及各种因子对移植细胞的影响提供实验资料.结论:(1)从人胎肝cDNA文库中成功扩增出人肝再生增强因子cDNA片段.(2)成功构建重组pEGFP-C<,1>-hALR真核表达质粒.(3)在体外质粒载体转染实验中,绿色荧光蛋白是一种简便、灵敏、不需任何底物的标记物.(4)转染pEGFP-C<,1>-hALR的LO2肝细胞培基中有hALR蛋白的存在,并能加速HepG<,2>细胞的DNA合成率,具有生物学活性.(5)建立pEGFP-C<,1>-hALR转染的LO2肝细胞抗性细胞克隆,传代8次后,经RT-PCR证明hALR已稳定存在,并有可能作为单基因或多基因修饰、可供肝细胞移植使用的工程细胞株.
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