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目的:探讨重组慢病毒介导的基质金属蛋白酶—2(MatrixMetalloproteinase—2,MMP—2)沉默对喉鳞癌侵袭生长的抑制作用。
方法: 采用核糖核酸(Ribose Nucleic Acid,RNA)干扰技术,运用MMP—2基因小干扰RNA(smallinterference RNA,siRNA)的重组慢病毒(MMP—2—RNAi—Lentivirus)转导喉鳞癌Hep—2细胞,并在荧光显微镜下观察重组慢病毒对Hep—2细胞的转染效率。通过MTT方法、流式细胞仪方法检测MMP—2—RNAi—Lentivirus重组慢病毒转导对喉癌细胞增殖的抑制作用;通过Boyden侵袭小室实验观察MMP—2—RNAi-Lentivirus重组慢病毒转染后喉癌细胞侵袭能力的变化;同时构建喉癌移植瘤模型,将MMP—2—RNAi—Lentivirus重组慢病毒瘤内注射,观察抑瘤效果,绘制肿瘤体积变化图。
结果: 荧光显微镜下见重组慢病毒MMP—2—RNAi—Lentivirus能高效地转导入靶细胞,转染效率在90%以上;MTT方法和流式细胞仪方法检测显示,MMP—2—RNAi—Lentivirus转导组Hep—2细胞增殖能力明显下降,凋亡率明显上升;侵袭实验显示,实验组Hep—2细胞中穿过人工基底膜的细胞数为(12±4)个,明显少于空载体对照组的(35±6)个(P<0.01);体内实验显示,MMP—2—RNAi—LentivirUS重组慢病毒瘤内注射后,裸鼠移植瘤平均重量和平均体积明显小于对照组,抑瘤率约为44%。
结论: 慢病毒介导的MMP—2基因沉默能有效的抑制喉癌的侵袭,生长及增殖,有望为喉癌和其它恶性肿瘤的基因治疗提供一定的实验依据。