普通白菜成花相关生长素代谢基因筛选与克隆表达分析

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普通白菜(Brassica rapa ssp.chinensis Makino var.communis Tsen et Lee)是一种低温春化型植物,春季生产中易出现先期抽薹,因此研究其春化作用机理有着重要的实践意义。在植物的春化过程中,激素代谢是一种重要的调控途径,而生长素起着一定的作用。生长素代谢在拟南芥及其他植物中均已有研究,但在普通白菜中还没有相关的报道。本研究比较了普通白菜春化过程及不同生育期茎尖生长素的含量,并通过表达谱比较分析了生长素代谢关键酶编码基因的表达和差异表达基因的功能,为阐明普通白菜春化开花过程中生长素含量变化的分子机制提供了参考。在此基础上,克隆了普通白菜生长素代谢基因Bra011821和Bra017871,分析其表达模式并构建了超表达载体,为后续的转基因功能验证打下了基础。主要结果如下:1.比较了普通白菜春化及生长发育过程中茎尖的生长素含量,发现在低温处理后其生长素含量明显降低,随后在其营养生长过程中生长素含量逐渐增加,在花芽即将分化前又开始降低。2.通过RNA-seq方法对普通白菜春化还是开花过程中生长素代谢关键酶的编码基因进行表达分析,发现有4个基因Bra034975、Bra030246、Bra012239和Bra040296的表达变化趋势与生长素含量变化趋势相一致。3.比较V0 vs.CK0,V15 vs.V10和V16 vs.CK16的表达谱,根据FDR<0.01且Fold Change≥2,共筛选出15个差异表达基因与生长素含量相呼应,说明这些基因与生长素含量变化直接有关,进而影响春化作用。4.采用RT-PCR的方法从普通白菜中克隆到CYP79B2的同源基因Bra011821和Bra017871。这两个基因的编码序列全长分别为1554 bp和1623 bp,分别编码517和540个氨基酸。通过与十字花科其他物种的同源蛋白进行序列多重比对和亲缘关系分析,表明克隆到的这两个基因的确是普通白菜中的CYP79B2同源基因。5.采用qRT-PCR的方法对普通白菜不同器官中Bra011821和Bra017871的表达量进行分析,结果发现,Bra011821在根中的表达量最高,果荚中次之,而在茎中的表达量最低;Bra017871在根中的表达量最高,叶中次之,而在茎中的表达量最低。6.利用克隆得到的基因Bra011821和Bra017871,并构建了超表达载体,成功转化了农杆菌,为后续的转基因功能验证奠定了基础。
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