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松针为我国传统中药,在历代本草中均有记载,《别录》谓:其“主风湿疮,生毛发,安五脏”。《本草纲目》中记载:“松柏为百木之长”,服之“令人不老,轻身益气,不饥延年”。现代药理学实验研究表明,松针具有抗肿瘤、降血脂等作用。本课题在前期对松科(Pinaceae)松属(Pinus)植物马尾松(Pinus massoniana-Lamb)针叶化学成分的系统分离基础上,结合文献松针降血脂和抗肿瘤报道,对松针的抗肿瘤及降血脂的有效部位进行了初步研究。首先采用去卵巢大鼠模型进行松针降血脂作用的研究,探讨了其可能作用机制和影响因素;此外,采用体外细胞实验对松针的抗肿瘤活性部位进行了探讨,并对本实验室首次发现的一些新木脂素类化合物进行了抗肿瘤活性的实验研究,为松针的进一步的研究和开发奠定一定的研究基础。
本文分为两部分第一部分:松针不同部位提取物降血脂作用的研究目的:本实验研究松针对去卵巢大鼠脂代谢紊乱的影响,确定松针及其有效部位的降血脂活性。
方法:Wistar雌性大鼠60只。随机分成正常组、模型组、松针正丁醇部位组、松针水部位组、松针多糖部位组,每组10只。术后1周开始给药,每周测量一次体重,给药14周后处死动物,彻底摘除腹部脂肪并称重,计算腹部脂肪系数;剥离子宫称重,计算子宫系数;对大鼠血清和肝脏中甘油三酯(TG)、血清总胆固醇(sTC)和肝脏胆固醇(hTC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)进行检测;对各组大鼠的肝脏进行组织切片形态学观察。
结果:1.去卵巢15周后TC、TG、LDL-C均升高,松针提取物有降低TC、TG、LDL-C的作用,但对HDL-C和肝脏TC未看到显著的作用;
2.多糖部位的降血脂和抑制体重增加的作用与其它各部位相比更为显著;
3.各组肝脏的形态学观察,松针多糖能显著改善去卵巢大鼠肝脏的脂质堆积;
4.松针多糖部位和松针各部位对去卵巢大鼠的子宫萎缩没有抑制作用,所以松针各部位并不是通过雌激素样作用来降血脂的。
结论:松针提取物对去卵巢大鼠的脂质代谢紊乱有一定调节作用尤其是松针多糖有降低血脂及抑制体重增加的作用,与古文献记载“轻身益气”相一致。
第二部分:松针抗肿瘤作用实验研究目的:本实验主要是探讨松针抗肿瘤的有效部位,并将活性筛选与制备工艺相结合,结合工业化生产特点,使其制备工艺更符合工业生产,进一步探讨抗肿瘤的物质基础和化学成分。
方法:实验1:采用不同的提取方法对松针的抗肿瘤活性进行了研究,用MTT法对松针水提物和醇提物进行体外抗肿瘤活性对比实验;
实验2:将活性筛选与制备工艺相结合,采用D101大孔吸附树脂对具有抗癌作用的松针水提物进行洗脱,得到的洗脱物,用MTT法进行筛选,探讨了松针抗肿瘤活性部位;
实验3:对松针中分离得到的新木脂素类化合物进行了抗肿瘤活性筛选。
结果:1.水提部位比醇提部位对癌细胞的抑制作用强;
2.水提物对SMMC-7721、K562和MCF-7癌细胞均有抑制作用,具有时效和量效依赖关系;
3.松针水提物上D101大孔吸附树脂所得50%乙醇洗脱部位具有较好的抗癌活性,对SMMC-7721和K562的的抑制作用较强,对MCF-7的作用相对较弱;
4.松针的单体化合物中苯代四氢萘木脂素类化合物对SMMC-7721和K562的的抑制作用较强。
结论:松针水提物有抑制癌细胞生长的作用,其有效部位可能是经D101大孔吸附树脂洗脱的50%乙醇洗脱部位,在其木脂素成分中具有较强抗癌成分可能是属于苯代四氢萘木脂素类化合物-异落叶松脂素。