蛹虫草虫草素高产菌株的筛选及其发酵工艺研究

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蛹虫草[Cordyceps militaris(L.Fr)Link],又名北冬虫夏草、北虫草、蚕虫草,属子囊菌门(Ascomycota)核菌纲(Pyrenomycetes)球壳目(Sphaerinles)麦角菌科(Claviticpitaceae)虫草属(Coedyceps),是我国名贵中药材之一,具有很高的药用价值和经济价值。本课题以从9个蛹虫草菌株中筛选到的虫草素高产菌株为研究对象,对蛹虫草液体发酵培养的培养基、培养条件以及发酵工艺进行了优化,使蛹虫草液体发酵生产虫草素的产量提高至3000μg/ml,为工业化生产虫草素创造了前提条件。1.在9个供试菌株中,用相同的培养基配方和发酵工艺培养,并对其发酵液中虫草素含量测定,结果表明8号菌株是虫草素产量最高的菌株。2.对不同工艺的菌种、深层振荡发酵时间(d)、表层静止发酵时间(d)、接种量(%)、发酵初始pH等5个物理因素进行单因素试验。结果表明最佳工艺为:平皿接种避光培养15d后光照5d,然后制成分生孢子悬液后作为菌种;深层振荡发酵时间取4天;表层静止发酵时间为16天;发酵总周期为20天;接种量为2%(菌种为分生孢子悬液,浓度为3.2×10~9个/mL);发酵初始pH为6.45-6.95。3.以发酵液中虫草素含量和菌饼干重作为指标,筛选碳源、氮源及其浓度。结果表明,葡萄糖为最适碳源,最适浓度为5%;豆粕为最适氮源,最适浓度为5%。4.采用葡萄糖、豆粕、马铃薯浸出粉、腺苷作培养基配方的正交试验,结果表明,上述4种原料对蛹虫草液体发酵生产虫草素都有极显著影响,且最适配方为葡萄糖2%、豆粕8%、马铃薯浸出粉2%、腺苷0.4%。5.通过单因素试验对腺苷和葡萄糖最适浓度进行验证,得出腺苷和葡萄糖最适浓度分别为0.6%,2%6、研究表明,深层振荡发酵和表层静止发酵相结合的发酵工艺,更利于蛹虫草在液体培养基中的生长,能达到较大的生物量,且有利于菌丝体生长后期虫草素的合成。7、添加虫草素的前体物腺苷的试验表明,在低的发酵起始葡萄糖浓度下,能增强蛹虫草菌丝将腺苷转化成虫草素的能力,同时提高豆粕的浓度能进一步增强蛹虫草菌丝的转化能力。蛹虫草菌丝合成虫草素时需要大量的腺苷,而其合成腺苷的能力有限,因此在培养基中适当地添加腺苷,能提高虫草素的产量。在今后的研究工作中,提高腺苷转化率将是一个十分重要的任务和目标。
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