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该论文研究了贝母甾体生物碱的药效学及作用机制,并通过重组受体的方法构建了针对M2受体的药物筛选平台.实验的第一部分,采用豚鼠离体气管体外实验的方法,研究了贝母生物碱对M受体和H受体的拮抗作用,发现贝母甾体生物碱对M受体有竞争性拮抗作用,这可能是贝母镇咳平喘的潜在机制之一.同时,通过观察K<+>离子通道和磷酸二酯酶抑制剂对贝母生物碱气管舒张作用的影响,发现生物碱对M2受体亚型有选择性作用,对Ca<2+>内流也有部分抑制作用.对部分生物碱进行了整体动物试验,采用氨水引咳法和酚红排泌法,研究了其镇咳祛痰作用.结果表明贝母甲素、贝母乙素、西贝素、西贝素甙、蒲贝酮碱、鄂贝啶碱、蒲贝33、蒲贝34和贝母辛均可显著抑制氨水刺激引起的小鼠咳嗽,除了贝母甲素和贝母乙素外,其它的生物碱还可显著延长小鼠咳嗽潜伏期,所有的贝母生物碱均可显著增加小鼠酚红排泌量.实验的第二部分,通过磷酸钙共转染法将构建有人M2受体cDNA的质粒(pcDNA3.1+)转染进人胚肾293细胞(HEK293),用G418筛选普通293细胞,通过MTT法测定普通293细胞对G418的敏感剂量(500μg/ml),以此剂量筛选转染后的细胞,获得稳定表达M受体的细胞.用RT-PCR方法对受体表达进行检测,证明受体的表达是成功的.并以药物对细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量的影响作为指标,通过放射免疫方法,测定细胞内cAMP的含量,观察各贝母生物碱对细胞内cAMP含量的影响.结果表明,所用的几种生物碱:贝母甲素、贝母乙素、西贝素、西贝素甙、蒲贝酮碱均可使细胞内cAMP含量上升,与对照组细胞相比有显著差异.