目的以体外抗病毒、抑菌实验和体内抗金黄色葡萄球菌实验结果为指标筛选鱼腥草抗感染活性提取物,优化其提取工艺和大孔吸附树脂纯化工艺,制备鱼腥草抗感染活性组分,并通过体内抗炎实验评价组分药效和工艺优化效果。方法1.以鱼腥草为原料,采用回流法制备其水、30%乙醇、50%乙醇、75%乙醇4种不同溶剂提取物,采用水提醇沉法制备鱼腥草水提醇沉上清部分和沉淀部分2种提取物;建立鱼腥草总黄酮含量测定方法,测定以上6种提取物总黄酮含量;通过体外抗病毒、抑菌实验和体内抗金黄色葡萄球菌实验评价6种提取物抗感染活性。其中,体外抗病毒实验以EV71(肠道病毒71型)、HSV-1(单纯疱疹病毒Ⅰ型)、RSV(呼吸道合胞病毒)、CV-B3(柯萨奇病毒B3型)、CV-B5(柯萨奇病毒B5型)作为受试毒株;体外抑菌实验以金黄色葡萄球菌标准菌株CMCC(B)26003及其临床分离耐甲氧西林株、变形杆菌ATCC49027及其临床分离菌株、肺炎克雷伯菌标准菌株ATCC13883及其临床分离菌株为受试菌株。2.以总黄酮含量为指标,采用单因素实验和正交试验设计优化鱼腥草50%乙醇提取物的提取工艺,并应用最佳提取工艺制备得鱼腥草抗感染活性提取物。3.应用大孔吸附树脂技术纯化鱼腥草抗感染活性提取物。以总黄酮含量为指标,通过单因素实验考察样品吸附和洗脱条件,优化大孔吸附树脂对样品的纯化工艺,并应用最佳纯化工艺制备得鱼腥草抗感染活性组分。4.采用腹腔注射脂多糖法建立小鼠急性炎症模型,以血清中促炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量为指标,评价鱼腥草抗感染活性组分抗炎活性。结果1.鱼腥草6种提取物总黄酮含量测定结果显示50%乙醇提取物总黄酮含量最高。体外抗病毒、抑菌实验结果显示:6种提取物均具有一定的抗病毒、抑菌活性,其中30%乙醇提取物对EV71、HSV-1病毒的TI值为18.566、83.725,对金黄色葡萄球菌的MIC/MBC为3.125/6.25 mg/mL;50%乙醇提取物对EV71、HSV-1病毒的TI值为20.716、64.677,对金黄色葡萄球菌的MIC/MBC为1.5625/3.125 mg/mL。综合体外实验结果,50%、30%乙醇提取物抗感染活性较为显著。二者体内抗金黄色葡萄球菌实验结果显示:在同等给药剂量下,50%乙醇提取物给药组保护率高于30%乙醇提取物给药组,且小鼠体征恢复更好。综合体内外实验结果,50%乙醇提取物抗感染活性更高。2.正交试验设计法优化提取工艺结果显示:鱼腥草50%乙醇提取物最佳提取工艺为提取温度75℃、提取时间1.5 h、料液比1:20,应用最佳提取工艺制备的鱼腥草抗感染提取物总黄酮含量为22.58%。3.单因素实验优化大孔吸附树脂纯化工艺结果显示:样品吸附条件为上样浓度为9.032 mg/mL(以总黄酮含量计)、吸附流速1 mL/min;洗脱条件为以70%乙醇为洗脱剂,洗脱流速2 BV/h,洗脱体积3 BV。应用最佳纯化工艺制备的鱼腥草抗感染活性组分总黄酮含量为60.96%。4.抗炎实验结果显示:与模型组相比,鱼腥草抗感染活性组分给药组小鼠血清中促炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低(p<0.05),炎性反应得到治疗和控制。同时,与鱼腥草抗感染提取物相比,经过纯化工艺制备的鱼腥草抗感染活性组分药效显著提高。结论本研究从体外抗病毒、抑菌和体内抗金黄色葡萄球菌实验3个方面证实鱼腥草50%乙醇提取物抗感染活性最为显著,根据文献可知该组分以黄酮类成分为主,通过提取、纯化工艺优化提高组分总黄酮含量,体内抗炎实验进一步证实工艺优化可提高组分抗感染活性。