肿瘤严重危害人类健康，而肿瘤细胞转移和侵袭的特性，使得其很难通过外科手术的方法进行完全切除，因此快速有效的治疗策略就显得格外重要。以往的肿瘤治疗药物往往是以某个癌基因或抑癌基因为靶点，达到抑制肿瘤细胞增殖和促进肿瘤细胞凋亡的目的。这种治疗策略在临床上起到了一定疗效，但肿瘤发生发展的过程不单单是肿瘤细胞自身的问题，肿瘤的炎性微环境在肿瘤形成过程中发挥重要作用，大量的基质细胞、内皮细胞和免疫细胞均在肿瘤发生发展过程中行使重要的调控功能。如何改善肿瘤炎性微环境，动员机体固有免疫系统，激发杀伤性T细胞免疫应答，将会成为肿瘤治疗的新策略和新突破。Notch信号通路是调控多细胞生物发育的主要信号之一，通过细胞表面的Notch信号配体与相邻细胞的受体结合，导致NICD释放入核，与转录因子RBP-J结合并募集转录共激活复合物，启动下游基因表达。Notch信号通过旁侧抑制、旁侧诱导、干性维持和抑制分化等机制，在细胞增殖、分化及凋亡过程中发挥重要的调控作用。Notch的突变和表达异常往往会诱发多种疾病，甚至造成正常组织的癌变。在多种肿瘤组织中，Notch的激活程度都与肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭与转移等细胞功能密切相关，因而Notch靶向性药物也成为临床治疗和研究的热点之一。FHL1C是Notch信号的抑制剂，由N端的两个可介导蛋白间相互作用的LIM结构域，和C端的RBP-J特异性结合位点组成。其能够与RBP-J相互作用并同时募集转录抑制物PcG蛋白家族，抑制Notch信号下游基因的激活。然而FHL1C蛋白结构中并不含有核定位信号，其是否存在其他相互作用的伴侣分子，从而介导FHL1C入核并在生理和病理状态下发挥功能尚不明确。此外，Notch信号在T/B淋巴细胞分化、树突状细胞的成熟及分化以及骨髓来源巨噬细胞的不同功能活化中，均扮演重要的角色。巨噬细胞根据其激活方式的不同，可产生不同的免疫应答方式，在肿瘤免疫中发挥抗肿瘤和促肿瘤两种截然不同的双向功能。因此巨噬细胞在肿瘤发展过程中的作用机制逐步成为肿瘤学研究的热点，并很可能成为未来肿瘤细胞治疗的新方法。本科室前期研究发现，Notch信号可促进巨噬细胞发生M1型极化，抑制肿瘤形成，发挥抗肿瘤免疫的功能，但其调控巨噬细胞极化的分子机制尚不明确。本课题从肿瘤细胞和巨噬细胞两个方面，在分子水平和细胞水平初步探索了Notch信号途径在肿瘤发展过程中的作用机制，主要研究成果分为两个部分，包括以下方面：ⅠNotch调控肿瘤细胞EMT的初步研究1、利用免疫共沉淀和哺乳动物双杂交方法，验证发现FHL1C可与紧密连接蛋白ZO-1相互作用，荧光共聚焦发现过表达FHL1C后ZO-1PSG截短体细胞定位发生改变，提示FHL1C可介导ZO-1蛋白入核；2、qRT-PCR和划痕实验发现FHL1C可促进MCF-7细胞发生EMT，增强其迁移能力；进一步研究表明其对肿瘤细胞EMT的促进不依赖于Notch信号；ⅡNotch调控巨噬细胞极化的初步研究1、Notch信号通路可促进巨噬细胞表达miR-125a/miR-99b分子簇，过表达miR-125a促进巨噬细胞杀伤肿瘤细胞和抵抗病原菌入侵的能力，过表达miR-99b同样能够激活巨噬细胞进行炎性应答。miR-125a可靶向性降解FIH1表达，进而增强Hif-1α活性，促进iNOS合成；另一方面其可靶向抑制IRF4翻译，进而抑制MR表达。提示Notch信号通路上调miR-125a/miR-99b表达，并通过miR-125a靶基因FIH1和IRF4促进巨噬细胞M1型极化，抑制M2型极化；2、过表达miR-125a或miR-99b后，骨髓细胞中巨噬细胞数量明显增多，且在骨髓细胞向单核-巨噬细胞分化过程中miR-125a/miR-99b表达量逐渐升高。提示miR-125a/miR-99b促进骨髓细胞向单核-巨噬细胞分化；3、巨噬细胞过表达miR-125a后检测发现miR-125a/miR-99b及其宿主基因均表达升高，提示miR-125a促进自身初级转录本转录。总之，我们的结果显示FHL1C可促进肿瘤细胞发生EMT，促进其转移和迁移能力；Notch信号可通过miR-125a/miR-99b促进巨噬细胞发生M1型极化。以上揭示了Notch信号及其相关分子在肿瘤发生发展过程中的重要调控作用，为肿瘤的分子和细胞治疗提供理论依据，具有潜在临床应用价值。