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目的研究蜂胶黄酮类提取物对培养大鼠乳鼠心肌细胞静息钙的影响及对KCl、异丙肾上腺素(Iso)、哇巴因(Oua)诱导心肌细胞钙超载损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。
方法用出生后2~3天的SD(Sprague-Dawley)大鼠乳鼠进行心肌细胞原代培养,采用Fura-2作为细胞内游离钙离子的荧光探针,于阳离子测定系统检测心肌细胞内游离钙离子的浓度([Ca2+]i)。细胞培养18~32小时,检测心肌细胞静息[Ca2+]i,培养3~5天,观察心肌细胞[Ca2+]i的瞬间变化。并分组给药,监测给药前后心肌细胞[Ca2+]i变化。
结果静息状态下,心肌细胞[Ca2+]i为83.3±11.7nmol/L((-χ)±S,n=6),终浓度分别为0.2μg/mL,1μg/mL,5μg/mL蜂胶黄酮类提取物对静息[Ca2+]i无影响。30mmol/L、50mmol/L、70mmol/LKCl可剂量依赖性升高心肌细胞[Ca2+]i,预孵蜂胶黄酮类提取物15min,可抑制KCl引起的[Ca2+]i增高;当[Ca2+]o为0时,[Ca2+]i为52.6±5.7nmol/L((-χ)±S,n=6),正常外钙环境及无外钙两种情况下,10μmol/LIso均可使心肌细胞[Ca2+]i升高,预孵蜂胶黄酮类提取物能降低两种情况下[Ca2+]i增高;50μmol/LOua明显升高心肌细胞[Ca2+]i,0.2μg/mL蜂胶黄酮类提取物对[Ca2+]i升高无作用,1μg/mL,5μg/mL蜂胶黄酮类提取物能抑制Oua引起的[Ca2+]i的增高。对搏动心肌细胞,蜂胶黄酮类提取物能抑制心肌细胞钙瞬变的频率,降低钙瞬变[Ca2+]i最高值,同时蜂胶黄酮类提取物也能抑制高K+、、Iso、Oua引起的收缩期[Ca2+]i瞬间的变化、降低心肌细胞搏动频率。
结论(1)蜂胶黄酮类提取物对心肌细胞内静息钙无影响。(2)蜂胶黄酮类提取物能抑制KCl、Iso、Oua引起的[Ca2+]i升高。(3)蜂胶黄酮类提取物降低心肌细胞钙瞬变[Ca2+]i最高值,抑制钙瞬变频率。