【摘 要】
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本文以碳二亚胺偶合法合成了叶酸改性的PAMAM树形分子(FA-PAMAM),以PAMAM和FA-PAMAM为载体,凝胶电泳法研究表明树形分子与ODN配比(N/P)应大于16:1,透射电镜研究观察表明ODN与
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本文以碳二亚胺偶合法合成了叶酸改性的PAMAM树形分子(FA-PAMAM),以PAMAM和FA-PAMAM为载体,凝胶电泳法研究表明树形分子与ODN配比(N/P)应大于16:1,透射电镜研究观察表明ODN与PAMAM及其衍生物静电复合后对粒径影响较小,粒径在50~80nm,适合于体内外基因转染的要求。以U251胶质瘤细胞为模型研究了PAMAM载体对ASODN的转染效果,并与oligofectamin进行了对比。动态荧光显微镜观察显示PAMAM对ASODN的瘤细胞转染明显优于oligofectamin。以RT-PCR检测细胞EGFR的mRNA水平表达,以细胞免疫荧光检测EGFR蛋白表达,进一步证明了PAMAM对ASDON优良的转染效果。以MTT法检测细胞增值,证明PAMAM具有一定的细胞毒性,但与oligofectamine毒性相当,并且PAMAM/ASODN复合物的毒性随N/P比的增大而增大。以C6鼠胶质瘤细胞系体内外实验研究FA-PAMAM靶向恶性脑胶质瘤的ASODN基因转染与肿瘤抑制。流式细胞仪测定体外转染率显示FA-PAMAM/ODN组具有97.36%的高转染率。体内外细胞对照实验证明经ASODN基因治疗后C6鼠胶质瘤细胞的增殖、侵袭能力显著降低,凋亡细胞数显著上升,并且FA-PAMAM/ASODN优于PAMAM/ASODN组,与oligofectamine/ASODN组差异显著,证明了FA-PAMAM的肿瘤靶向作用。静脉注射荧光标记的FA-PAMAM/ODN、PAMAM/ODN、oligofectamine/ODN和祼ODN,研究载体介导的ODN在C6鼠胶质瘤动物模型的体内分布,证明与其他投递系统比较,FA-PAMAM在瘤体组织分布较多,显示其对肿瘤组织的全内靶向性。
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