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[目的]研究亚临床甲状腺功能减退的不孕女性卵巢颗粒细胞的分泌功能。通过探究亚甲减不孕女性卵巢颗粒细胞上TSHR、FSHR、CYP19A1的表达变化,进而探讨TSH对于颗粒细胞分泌功能的影响与作用机制。[研究方法]第一部分卵巢颗粒细胞的分离与鉴定收集2018年09月至2019年1月于苏州大学附属第一医院生殖中心进行IVF/ICSI辅助生育治疗的不孕女性取卵当日卵泡液,用Percoll密度梯度分离液分离出颗粒细胞,通过流式细胞术与细胞免疫荧光术检测颗粒细胞特异性蛋白的FSHR,进行颗粒细胞的鉴定。第二部分TSH影响颗粒细胞分泌功能的相关研究1.采用队列研究的方法,对于在2018年09月至2019年1月于苏州大学附属第一医院生殖中心进行IVF/ICSI辅助生育治疗的不孕女性,将月经期血清TSH<2.5 mIU/L的人群设为正常组,月经期血清TSH>2.5mIU/L的人群设为升高组,于取卵当日收集卵泡液,用Percoll密度梯度分离液分离出颗粒细胞沉淀,采用RT-PCR的方法检测两组颗粒细胞上FSHR、TSHR、CYP19A1的mRNA表达水平。2.随机选取4名IVF/ICSI辅助治疗的女性,收集取卵当日卵泡液,用Percoll密度梯度分离液分离出颗粒细胞,体外培养后加入浓度分别为0、2.5、5.0、10mIU/L的TSH 刺激 24h。2.1收集上清,于苏大附一院核医学科采用放射酶联免疫法检测雌二醇、孕酮的浓度。2.2 RT-PCT 检测细胞 TSHR、CYP19A1 的 mRNA 水平。2.3 Western Blot检测细胞TSHR蛋白的表达水平。[结果]第一部分卵巢颗粒细胞的分离与鉴定1.流式细胞术检测到几乎所有细胞胞膜上都有FSHR的表达,15.3%的细胞FSHR表达强阳性。2.细胞免疫荧光术检测到胞质内及包膜上均有FSHR的表达。第二部分TSH影响颗粒细胞分泌功能的相关研究1.升高组与正常组相比,TSHR mRNA水平升高,FSHR mRNA与CYP19A1 mRNA水平差异不具有统计学意义。2.1原代卵巢颗粒细胞随TSH刺激浓度升高,分泌的雌二醇与孕酮水平随之下降。2.2原代卵巢颗粒细胞随TSH刺激浓度升高,TSHR mRNA的相对表达量随之升高,具有统计学意义;而CYP19A1 mRNA的相对表达量随之下降,具有统计学意义。2.3原代卵巢颗粒细胞随TSH刺激浓度升高,TSHR的蛋白水平随之升高,差异有统计学意义[结论]1.卵泡液通过Percoll密度梯度分离法所得细胞,在胞膜以及胞质内均有FSHR的表达,鉴定为卵巢颗粒细胞。2.基础血清TSH>2.5mIU/L的不孕人群,卵巢颗粒细胞的TSHR mRNA水平较TSH<2.5mIU/L的人群表达量高,具有统计学意义。3、原代卵巢颗粒细胞随外源加入的TSH浓度升高,分泌的雌二醇、孕酮随之减少,TSHR在蛋白和核酸水平表达上调,CYP19A1在核酸水平表达下调。4、高水平的TSH可降低颗粒细胞甾体类激素分泌,可能与TSH上调颗粒细胞TSHR的表达,下调颗粒细胞芳香化酶的表达有关。