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苯二氮□类药物（Benzodiazepines，BZDs）多为1，4-苯并二氮□的衍生物，临床常用的有20余种，因其具有镇静催眠、抗焦虑、抗惊厥和肌肉松弛作用[1]，常被不法厂商添加于镇静安神类中成药及保健食品中，以增强其疗效；或被个别畜牧业饲养者作为生长促进剂添加于饲料中[2]，使动物嗜睡少动，减少动物维持体能的营养物质消耗，有益于增重；或在动物运输和屠宰过程中使用，减轻动物机体对不良刺激的反应，降低死亡率，防止肉质的变化。但服用BZDs可产生头晕嗜睡、乏力、昏迷、呼吸抑制等副作用，长期服用容易产生耐受性、依赖性和成瘾性[3]。因此，我国《药品管理法实施条例》与《食品卫生法》明确规定，禁止在中成药及保健食品中添加化学药物成分。农业部第176号公告规定在动物饲料和饮用水中严禁使用BZDs。因此，建立检测中成药、保健食品及动物源性食品中BZDs的含量方法具有重要意义。本实验通过对样品前处理方法和仪器分析条件的系统优化，建立了灵敏、准确、快速、实用，能同时检测中成药、保健食品和动物源性食品中22种BZDs的LC-MS/MS分析方法，全文由三部分构成。第一部分LC-MS/MS同时检测中成药及保健食品中非法添加22种BZDs的方法研究目的：建立同时检测中成药及保健食品中22种BZDs的LC-MS/MS方法。方法：中成药及保健食品样品中的BZDs在pH为11的硼砂缓冲溶液中，经乙醚-二氯甲烷（8:2,V/V）提取，浓缩至干后用乙腈-水（2:8,V/V）定容检测。色谱柱：Shimadzu VP-ODS（150mm×2.0mm，5.0μm）；流动相：A：乙腈，B：2mmol/L乙酸铵水溶液（含0.2％甲酸），梯度洗脱；流速：0.30mL/min；柱温：40℃；进样量：30μL。质谱条件：电喷雾正离子检测模式(ESI+)，多反应监测(MRM)；电喷雾电压：5.5KV；雾化气压力：0.448MPa；气帘气压力：0.310MPa；辅助气流速：0.207MPa；碰撞气流速：0.069MPa；离子源温度：650℃；碰撞室入口电压为10V，碰撞室出口电压为12V。同位素内标法定量。结果：22种BZDs在0.5～50.0μg/L范围内的线性相关系数均大于等于0.9990，检出限范围为0.02～0.21μg/kg，定量限范围为0.06～0.68μg/kg。添加浓度水平为1.0，2.0和5.0μg/kg时，平均回收率范围为72.2%～116.5%，相对标准偏差范围为2.4%～12.2%。结论：本方法灵敏度和准确性高、重现性好，可用于中成药及保健食品中22种BZDs的含量测定及结构鉴定。第二部分LC-MS/MS同时检测猪肉样品中22种BZDs残留的方法研究目的:建立同时检测猪肉中22种BZDs残留的LC-MS/MS分析方法。方法：猪肉样品中残留的BZDs在pH为5.2的乙酸铵缓冲溶液中酶解后，用氨水调节pH值大于9.5，经乙酸乙酯-异丙醇(v/v，5:1)提取，正己烷去脂，MCX离子交换柱净化，采用第一部分建立的LC-MS/MS方法对样品进行定性和定量分析。结果：22种BZDs的检出限（S/N≥3）范围为0.01～0.13μg/kg，定量限（S/N≥10）范围为0.04～0.45μg/kg。添加浓度水平为1.0，2.0和5.0μg/kg时，平均回收率范围为72.0%～107.2%，相对标准偏差（RSD）范围为2.3%～9.1%。结论：本方法灵敏度和准确性高、重现性好，可对猪肉样品中22种BZDs进行定性和定量分析。第三部分LC-MS/MS同时检测牛奶样品中22种BZDs残留的方法研究目的：建立同时检测牛奶中22种BZDs残留的LC-MS/MS分析方法。方法：牛奶样品中残留的BZDs在pH为5.2的乙酸铵缓冲溶液中酶解后，用饱和乙酸铅沉淀蛋白质，用氨水调节pH值大于9.5，经乙酸乙酯-异丙醇(v/v，5:1)提取，正己烷去脂，MCX离子交换柱净化，采用第一部分建立的LC-MS/MS方法对样品进行定性和定量分析。结果：22种BZDs检出限（S/N≥3）范围为0.01～0.11μg/kg，定量限（S/N≥10）范围为0.04～0.37μg/kg。添加浓度水平为1.0，2.0和5.0μg/kg时，平均回收率在70.9%～108.1%之间， RSD范围为1.7%～10.9%。结论：本方法灵敏度和准确性高、重现性好，可对牛奶样品中22种BZDs进行定性和定量分析。