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CD7是一个40kD的跨膜糖蛋白。在病理情况下，CD7与一些疾病，特别是血液系统肿瘤、HIV感染、类风湿关节炎的发生有关。因此，深入研究CD7的功能，对探讨机体的某些生理和病理过程乃至临床上有效治疗相关疾病具有重要意义。以CD7抗体为载体的免疫毒素已用于白血病、GVHD和艾滋病的治疗。 为获得充足的CD7材料来源，以制备抗CD7基因工程抗体并研究CD7的作用机制，本文进行了以下工作：（1）人CD7膜外区cDNA在大肠杆菌中的表达，并对表达的融合蛋白进行了纯化。（2）人CD7在哺乳类细胞中的表达并对其在LPS信号传递及细胞凋亡中的作用进行探讨。主要研究内容及结果： 1．CD7膜外区cDNA在大肠杆菌中的表达及重组融合蛋白的纯化 （1）通过PCR调整CD7膜外区cDNA的阅读框架，使之与生物素化蛋白基因的阅读框架一致。缺失了编码CD7信号肽的核甘酸序列，并增加了一个大肠杆菌偏性终止密码子。将扩增得到的目的片段同原核表达载体Pinpointxa-3连接后构建重组原核表达载体，阳性重组子命名为Pinpointxa3-CD7。DNA序列分析表明重组质粒中编码CD7膜外区的cDNA具有正确的阅读框架。 （2）将阳性重组子转入大肠杆菌DH5α，用IPTG诱导重组融合蛋白的表达。SDS-PAGE、Western-blot鉴定结果显示：在约30kD的位置有重组融合蛋白的表达。利用四星软件分析结果显示：当诱导温度降为30℃，诱导时间为9小时，表达的重组融合蛋白占细菌总蛋白的13.48％，而在37℃诱导4小时，表达的融合蛋白仅为细菌总蛋白的7.3％。确定了最适表达条件后，用 600mmol／L IPTG，30℃，诱导时间为 9小时后收集细菌，用亲和树脂对CD7生物素化融合蛋白纯化，得到了初步纯化的融合蛋白产物。本实验成功地在大肠杆菌中表达了CD7生物素化融合蛋白，并获得了初步纯化的融合蛋白，为制备抗CD7基因工程抗体提供了良好的实验材料。 2．人CD7在哺乳类细胞中的表达及其功能探讨 ＊）根据Genebank数据库中人CD7 CDNA序列，设计并合成一段引物，通过PCR法从含CD7的质粒中扩增得到了CD7全长cDNA，扩增片段经Xhol、Xbal酶切后，同经相同酶切的线性化质粒pclneo、pcDNA3连接构建了重组真核表达载体pCllleO（D7、pcDNA3（D7。序列分析结果显示扩增得到的CD7全长cDNA具有正确的阅读框架。 C）通过电穿孔和磷酸钙法将重组质粒pCDNA3－CD7和空质粒pCDNA3转染 HEK293细胞和 J＊k成细胞，在有 G4的条件下培养 2～3周，筛选出 G4抗性克隆，用 RTPCR和 FCM对 G4抗性克隆细胞进行分析。结果显示：转染pcDNA3（D7的G418抗性克隆细胞有CD7mRNA和CD7蛋白的表达。 O）LPS分别刺激HEK293／CD7细胞和 HEK293后，用夹0ABC－ELISA法检测细胞上清中几七含量。结果显示：两种细胞在LPS刺激后，IL七的表达无明显差异。提示：CD7在LPS的信号传递中并没有发挥直接作用。 （4）PHA分别刺激CD7＋Jurkat牙 CD7—Jurkat细胞，通过FCM检测CD7”Jurkat和Jurkat的凋亡程度。结果：CD7”Jurkat在PHA刺激48 ’J’时后，出现一个亚二倍体峰，占细胞总数的12．7％，但CD7一Jurkat中的亚二倍体峰只占细胞总数的 5．19％。 O）表达CD7分子的哺乳类细胞模型的建立为进一步探讨CD7的功能提供了良好的实验材料。