【摘 要】
：
该论文利用载体呈现技术和重叠延伸反应(PCR)构建K88ac-STII融合基因,并在pET-28a原核表达载体中进行表达.根据K88ac结构基因设计一对引物,并使引物两端含有NcoⅠ和XhoⅠ限制
论文部分内容阅读
该论文利用载体呈现技术和重叠延伸反应(PCR)构建K88ac-STII融合基因,并在pET-28a原核表达载体中进行表达.根据K88ac结构基因设计一对引物,并使引物两端含有NcoⅠ和XhoⅠ限制性内切酶位点.通过PCR技术获得K88ac结构基因846bp,用限制性内切酶BsaJI将846bp的片段酶切为536bp和310bp的两个小片段,采用重叠延伸PCR技术,将STII的部分结构基因嵌入K88ac结构基因高度可变区域,克隆于载体pBS-T,得到阳性克隆,经过序列测序,表明已成功构建了K88ac-STII融合基因,命名为T-K88ac-STII.用NcoI和XhoI限制性内切酶分别酶切重组质粒和表达载体pET-28a,分别回收894bp和5.2Kb片段,用T4 DNA连接酶将回收片段连接,构建原核表达重组质粒pET-K88ac-STII,将此重组质粒转化到DH10B,菌落PCR鉴定后,进行大量培养,提取重组质粒pET-K88ac-STII,再将此质粒转入BL21表达菌,经IPTG诱导表达后,菌体蛋白进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE).结果显示,在25-35Kd之间出现一条特异条带,且表达量高.回收菌体蛋白沉淀,进行琼扩实验,结果表明K88ac蛋白在工程菌BL21中得到了表达.进一步证实了K88ac菌毛基因高变区上游可以作为外源片段的插入位点而不影响K88ac菌毛蛋白的活性.为仔猪细菌性腹泻基因工程苗的研制提供了新的思路.
其他文献
禽白血病(Avian Leucosis)是由禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus，ALV)和禽肉瘤病毒(Avian Sarcoma Virus，ASV)群中的病毒感染引起的多种肿瘤性疾病的统称。该病在蛋鸡、肉鸡
应用精益管理思维,需要企业财务管理活动具备持续精细化的基本特征,同时对企业的成本管理活动提出更高的要求,包括不限于企业成本管理计划设定、生产计划调整、物流信息反馈
本研究工作分为三个试验： 试验一，葡萄糖酸钙抗小鼠铅中毒的作用。选择150只20g左右的健康昆明种小白鼠，随机分为5组，每组3个重复。1组为对照组，饲喂基础日粮；2组为铅中毒组，饲喂
本文探讨了以河北某地低品位钙基膨润土为原料 ,制备活性土的机理 ,阐述了酸处理对试样化学组成和物理性质的影响以及制备的活化土用于实际生产的可行性
In this paper, the
目的探讨分析腹腔镜结直肠癌根治术治疗老年结直肠癌患者对胃肠功能改善效果。方法 90例结直肠癌老年患者,根据手术方法不同分为观察组(47例)与对照组(43例)。对照组接受开腹
革兰氏阴性菌感染是兽医临床最常见的细菌病，这些细菌除本身具有致病性外，还会在抗菌治疗过程中释放内毒素(ET)，导致全身失控性炎症反应综合症(SIRS)和脓毒性休克的发生，引起多器
一、商战主角rn长城汽车是中国汽车品牌,成立于1984年,总部位于河北保定.具有发动机、前后桥、变速箱等核心部件的独立生产和配套能力,是香港H股市场上第一家民营汽车企业,是
2013年11月29日至12月1日,一年一度的Clockenlap香港音乐节在香港西九龙海滨长廊举行。Clockenlap2013是集亚洲以西方音乐之大成的香港最大型音乐节,在为期三天的活动中,吸引
根据已报道的BAFF的开放阅读框架(ORF)序列设计特异性引物，以鸡的法氏囊淋巴细胞的总RNA为模板进行RT-PCR。将PCR回收产物与克隆载体pGEM-T连接，并转化E．coli DH5α，取阳性克隆进
本研究在克隆Ctod-β2m分子基础上，分析了Ctid-MHCⅠ多样性；并对Ctid-MHCⅠ在各组织的表达进行了定量。最后，表达、鉴定了Ctid-MHCⅠ重组蛋白。 本研究首先构建了草鱼cDNA文