论文部分内容阅读
目的:观察雷公藤内酯醇-聚乙烯亚胺-环糊精复合物(TP-PEI-CyD)对乳腺癌细胞MCF-7/Taxol耐药性的逆转作用,并初步探讨其作用机制。方法:1.采用CCK-8法测紫杉醇、顺铂及TP-PEI-CyD对MCF-7及MCF-7/TAXOL细胞株生长抑制率,计算出各自的IC50值、MCF-7/TAXOL胞株的耐药倍数以及TP-PEI-CyD对MCF-7/TAXOL细胞株的低毒浓度范围;2.根据所得的IC50值,选择低毒浓度TP-PEI-CyD(0.5ug/ml、1.5ug/ml)联合不同浓度的紫杉醇(2、4、6、8、10ug/ml)和顺铂(1、5、10、20、30ug/ml)处理MCF-7/TAXOL细胞后,用CCK-8法测紫杉醇和顺铂联合TP-PEI-CyD后的IC50,并计算逆转倍数;3.选择低毒浓度TP-PEI-CyD(0.5ug/ml、1.5ug/ml)单独或联合紫杉醇(10ug/ml)和顺铂(10ug/ml)处理MCF-7/TAXOL细胞后,应用流式细胞术测紫杉醇和顺铂联合TP-PEI-CyD前后的细胞凋亡情况;4.选择TP-PEI-CyD(1ug/ml)、紫杉醇(1ug/ml)或顺铂(2.5ug/ml)单独和联合用药分别作用于MCF-7/TAXOL细胞,采用RT-PCR检测各组细胞的耐药基因MRP、LRP以及GST-π基因表达水平。结果:1.CCK-8实验结果显示,MCF-7细胞对紫杉醇、顺铂、TPL和TP-PEI-CyD的IC50分别为(0.23±0.02)ug/ml、(3.66±0.19)ug/ml、(0.41±0.12)μg/mL、(7.41±0.89)μg/mL,MCF7/Taxol细胞对紫杉醇、顺铂、TPL和TP-PEI-CyD的IC50分别为(6.19±0.17)ug/ml、(23.59±0.40)ug/ml、(0.16±0.05)ug/ml、(3.39±0.38)μg/mL,差异有统计学意义(P<0.05),MCF-7/Taxol对紫杉醇和顺铂的耐药倍数(RI)分别为26.91、6.45;对比TPL和TP-PEI-CyD分别作用于MCF-7和MCF-7/Taxol细胞后的IC50值,发现TPL的量分别是是TP-PEI-CyD中TPL含量的7倍、6倍,同时MCF-7/Taxol对TPL和TP-PEI-CyD不具有耐药性;将TP-PEI-CyD对MCF-7/Taxol细胞抑制率<15%的低毒剂量设置为1.5μg/mL和0.5μg/mL一高一低两个逆转浓度。2.0.5μg/mL和1.5μg/mL的TP-PEI-CyD与紫杉醇或顺铂联合用药后发现,加入0.5μg/mL TP-PEI-CyD后,紫杉醇和顺铂对MCF-7/Taxol细胞的IC50值分别由(6.19±0.17)μg/mL、(23.59±0.40)μg/mL降低到(4.43±0.30)μg/mL、(21.65±0.54)μg/mL(P<0.05),逆转倍数分别为1.39、1.08。加入1.5μg/mL TP-PEI-CyD后,紫杉醇和顺铂对MCF-7/Taxol细胞的IC50值分别由(6.19±0.17)μg/mL、(23.59±0.40)μg/mL降低到(3.28±0.16)μg/mL、(10.61±0.81)μg/mL(P<0.05),逆转倍数分别为1.89、2.22。3.细胞凋亡结果显示,各组药物作用于MCF-7/Taxol细胞24h后,空白组的凋亡率为(7.11±0.96)%,紫杉醇组的凋亡率为(16.11±5.31)%,顺铂组的凋亡率为(13.42±1.69)%,0.5ug/mlTP-PEI-CyD组的凋亡率为(9.96±0.62)%,1.5ug/mlTP-PEI-CyD组的凋亡率为(13.38±2.91)%,紫杉醇+0.5ug/mlTP-PEI-CyD组的凋亡率为(29.13±0.43)%,顺铂+0.5ug/mlTP-PEI-CyD组的凋亡率为(23.14±2.30)%,紫杉醇+1.5ug/mlTP-PEI-CyD组的凋亡率为(57.79±6.88)%,顺铂+1.5ug/mlTP-PEI-CyD组的凋亡率为(54.24±5.92)%,紫杉醇或顺铂与TP-PEI-CyD联合用药后的凋亡率比单独用药时的凋亡率显著增加(P<0.05),紫杉醇或顺铂与1.5ug/mlTP-PEI-CyD联合用药是的凋亡率高于紫杉醇或顺铂与0.5ug/mlTP-PEI-CyD联合用药的凋亡率(P<0.05)。4.RT-PCR实验结果显示,TP-PEI-CyD(1ug/ml)联合紫杉醇(0.1ug/ml)或顺铂(2.5ug/ml)作用于MCF-7/Taxol细胞6小时后,GST-π、LRP和MRP基因的mRNA表达水平相对于紫杉醇或顺铂组显著降低,P<0.05。结论:1、TP-PEI-CyD可以增加人乳腺癌MCF-7/Taxol对化疗药的敏感性,从而起到逆转人乳腺癌MCF-7/Taxol细胞的多药耐性的作用;2、TP-PEI-CyD逆转人乳腺癌MCF-7/Taxol细胞的多药耐性的机制可能与下调相关耐药基因MRP、LRP及GST-π的表达有关。