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研究目的1.探究血浆VEGF-B水平与非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的关系。2.探究血浆VEGF-B水平与与血压,肾功能,糖脂代谢之间的关系。研究方法1.从武汉协和医院体检中心招募健康体检受试者及NAFLD受试者。NAFLD的判定主要根据肝脏超声结果,辅以其他检查结果及疾病史。2.收集受试者的体重指数（BMI）,血压,肝肾功能,空腹血糖血脂,HbA1c,胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）等,酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血浆VEGF-B水平。3.两组间差异使用T检验及ANCOVA分析;指标间相关性使用相关性分析及多元分析。研究结果1.NAFLD受试者的血浆VEGF-B水平（40.11±16.93pg/ml）明显高于非NAFLD受试者（34.73±14.69pg/ml）（P=0.022）。对两组进行协方差分析,控制了FPG,BMI,性别和年龄后,两组间仍然有差异。2.在单变量分析中,VEGF-B与γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）和HOMA-IR呈正相关（分别为q=0.242;P=0.001;q=0.174;P=0.019）。多元线性回归分析显示,在调整年龄和性别后,γ-GT和ALT仍与VEGF-B独立相关（分别为q=0.286;P=0.01;q=0.237;P=0.033）。3.相关性分析及多元分析结果显示血浆VEGF-B与血压、肾功能显著相关。研究结论1.NAFLD人群血浆VEGF-B水平较非NAFLD人群升高,VEGF-B可能是NAFLD发病的新的血浆生物标志物。2.VEGF-B与血压及肾功能显著相关,可能是早期发现高血压和肾功能不全的合适生物标志物。研究目的1.探究VEGF-B在人、小鼠以及体外细胞模型非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）中的表达变化。2.探究VEGF-B在NAFLD发病中的作用。研究方法1.从GEO数据库中下载GSE89632数据集,其中包含健康个体24人,NAFLD个体39人,使用Network Analyst在线网站分析差异基因,在芯片数据集中寻找每个样本表达VEGF-B基因的数据,分析其在两组间是否有差异。2.db/db小鼠及其对照小鼠各5只予以普通饮食喂养至16周末,取小鼠肝脏组织,进行油红O及H＆E染色,细胞内TG含量检测肝脏脂质沉积情况,免疫荧光染色观察肝脏组织VEGF-B表达及两组间差异情况,qPCR及WB检测两组间肝脏脂质代谢、内质网应激、细胞凋亡等相关指标、以及VEGF-B表达差异。3.体外培养HepG2细胞及THP-1细胞,棕榈酸（PA）处理构建脂肪肝细胞模型,油红O染色及细胞内TG含量检测脂质沉积情况,qPCR及WB检测两组间脂质代谢、内质网应激、细胞凋亡等相关指标、以及VEGF-B表达差异。4.构建VEGF-B的siRNA并干预HepG2细胞48h,检测VEGF-B表达是否降低,油红O染色及细胞内TG含量检测脂质沉积情况,qPCR及WB检测两组间脂质代谢、内质网应激、细胞凋亡等相关指标基因表达差异。5.使用人重组VEGF-B蛋白干预HepG2细胞48h,油红O染色及细胞内TG含量检测脂质沉积情况,qPCR及WB检测两组间脂质代谢、内质网应激、细胞凋亡等相关指标基因表达差异。研究结果1.分析GSE89632数据集,健康对照组与NAFLD组共有353个显著差异基因。与健康对照组相比,NAFLD组VEGF-B基因表达水平更高（p=0.0005）。2.与对照小鼠相比,db/db小鼠在16周龄时有明显的肝脏脂质沉积。免疫荧光染色结果显示肝脏组织中肝细胞及肝脏巨噬细胞均表达VEGF-B,并且db/db小鼠肝脏组织中肝细胞及巨噬细胞VEGF-B表达较对照组升高。db/db小鼠肝脏PPARr、SREBP1、ACO、FASN、CD36、FATP4以及VEGF-B基因表达较对照组升高,BCL2基因则较对照组降低。3.体外成功构建脂肪肝细胞模型,PA处理HepG2细胞后脂质沉积明显增多。HepG2细胞脂肪肝模型组PPARr、SREBP1、FASN、ACC、CD36、ATF6、BAX及VEGF-B基因表达较对照组升高,BCL2基因表达较对照组降低。在THP-1细胞中PA处理组VEGF-B表达水平较对照组高。4.在VEGF-B siRNA干预的HepG2细胞中,细胞内脂质沉积减少,qPCR及WB结果显示siRNA干预成功,VEGF-B表达明显减少。siRNA干预组细胞PPARr、SREBP1、CD36、FATP1、FATP3及BAX基因表达较对照组降低。5.在人重组VEGF-B蛋白干预的HepG2细胞中细胞内脂质沉积增多,VEGF-B蛋白干预组细胞PPARr、FATP1、FABP1及ATF6基因表达较对照组升高,BCL2基因表达较对照组降低。研究结论1.在NAFLD人群、小鼠及细胞模型中,VEGF-B表达水平高于正常对照组。2.VEGF-B基因主要通过调节脂质生成、脂质转运、内质网应激及细胞凋亡参与NAFLD的发生。研究目的1.探究NAFLD人群外周血单个核细胞VEGF-B基因表达变化。2.探究NAFLD人群外周血单个核细胞中VEGF-B基因的表观遗传调控机制。研究方法1.在我院体检中心招募NAFLD及对照人群,收集受试者外周血并分离外周血单个核细胞,qPCR及WB检测外周血单个核细胞中VEGF-B表达水平。2.在人群外周血单个核细胞中检测VEGF-B基因启动子区DNA甲基化及组蛋白修饰的变化。研究结果1.NAFLD人群外周血单个核细胞中VEGF-B表达水平较对照人群高。2.NAFLD人群外周血单个核细胞VEGF-B基因启动子区DNA甲基化及组蛋白修饰H3K4me3、H3K9me2、H3K14ac、H3K18ac与对照人群没有差别,组蛋白修饰H3K27me3在NAFLD人群较对照人群降低。研究结论1.NAFLD人群外周血单个核细胞VEGF-B表达水平较对照人群高。2.NAFLD人群VEGF-B表达可能至少部分受组蛋白修饰H3K27me3调控。