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霍山石斛(Dendrobium huoshanness)在自然条件下,从播种到开花需3年左右。研究霍山石斛的开花过程,缩短其开花年限;在理论上或是在应用上都具有重要意义。用组织培养方法研究诱导霍山石斛花芽发端并发育成开花植株,由于试管兰花一年四季都有花蕾形成,这样有助于进一步了解花的发育过程。 本文研究了TDZ、BA、糖浓度、低温15/5℃(日/夜)、氮含量、转瓶时间对霍山石斛组培苗花芽发生的影响。材料为4个月苗龄的组培苗和来自于4个月苗龄的组培苗的假鳞茎。筛选出诱导开花的适宜培养基后,定期取材(茎尖),进行石蜡切片,试图找出花芽分化的起始时间;使用HPLC测定植物中三种内源激素IAA、ABA、GA3含量的变化;通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白组份分析。 研究发现,在改良的MS基本培养基(1/6氮、5倍磷),糖浓度提高到40g/L,并加入适宜浓度(0.02mg/L)的TDZ可诱导霍山石斛小苗在2~5个月开花,5个月内统计诱导花芽发生率为50%左右。这种诱导提早开花现象,是发生在小苗基部新萌发的幼苗。花芽顶生,在叶腋间也有花发生。低浓度TDZ诱导的花芽多为顶生单花。高浓度TDZ诱导的花芽多为总状花序。BA诱导霍山石斛开花率较低,而且小苗褐化严重。减少培养基中氮含量和低温有利于霍山石斛花芽发生。由于所诱导的花芽正常开放率较低,尝试着将小苗在诱导花芽发生的培养基中培养一段时间后,转移到无激素的MS培养基中,发现大多花芽能正常开放。 处理组为MS(1/6N,5P)+TDZ0.02,附加蔗糖40g/L,琼脂8g/L,pH5.6~5.8。同时设置对照组:MS,附加蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.6~5.8。通过制作石蜡切片,观察到处理组在90天时叶腋间有花芽发生。处理组内源激素IAA含量在90~120d明显减少,GA3与诱导花芽发生关系不明显,由于某种原因,未检测到ABA。处理组在90~120d出现一特异蛋白。