【摘 要】
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目的:本实验采用高脂高糖饲料喂养结合注射链脲佐菌素（STZ）的方法,建立2型糖尿病肾损害（diabetic nephropathy,DN）的动物模型,应用灸药结合,即中药贴敷神阙穴配合内服组方（金匮肾气丸合五子衍宗丸加减）,对DN模型大鼠进行干预性治疗,并以单一内服中药组方（金匮肾气丸合五子衍宗丸加减）及单一外敷神阙穴为对照,旨在通过检测模型大鼠血糖、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、血脂以及用蛋
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目的:本实验采用高脂高糖饲料喂养结合注射链脲佐菌素（STZ）的方法,建立2型糖尿病肾损害（diabetic nephropathy,DN）的动物模型,应用灸药结合,即中药贴敷神阙穴配合内服组方（金匮肾气丸合五子衍宗丸加减）,对DN模型大鼠进行干预性治疗,并以单一内服中药组方（金匮肾气丸合五子衍宗丸加减）及单一外敷神阙穴为对照,旨在通过检测模型大鼠血糖、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、血脂以及用蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）法检测肾组织中转化生长因子（TGF-β1）及纤维连接蛋白（FN）的含量,探讨灸药结合对DN大鼠肾损害的治疗作用及其可能机制,为临床中医药治疗DN提供证据支持。材料与方法:健康SPF级雄性大鼠50只,体重在250g±20g,适应性喂养1周。随机分为空白对照组10只,常规饲料喂养,造模组40只,高脂高糖饲料喂养。均在适宜室温下饲养28天。造模组中大鼠体重不达340±10g者剔除。造模前禁食12h后对造模组大鼠腹腔以50mg/kg剂量的STZ进行注射,72h后测空腹血糖≥16.7mmol/L即为造模成功,列入观察,其中血糖不达标者补注STZ一次。空白对照组注入同剂量的无菌枸橼酸缓冲液,继续普通饲料喂养,造模组继续给予高脂高糖饲料,自由进食水喂养。从空白对照组和造模组中各随机抽取8只,进行眶静脉取血;定量检测Scr、BUN,（P<0.05）有统计学意义,说明大鼠出现了肾损害。造模期间因体重或血糖太低或不耐受死亡共剔除12只。造模组大鼠用SPSS22.0随机法分为四组,即模型对照组、内治组、外治组、灸药结合组,各7只。内治组按照4ml/kg/d灌胃金匮肾气丸和五子衍宗丸合方加减组方治疗;外治组选用附子、肉桂等药物研磨黄酒调匀贴敷神阙穴同时灌注同等体积的生理盐水,1次/d;灸药结合组是两种治疗方法相配合;空白对照组和模型对照组每天同一时间灌胃相同剂量的生理盐水。各组7d一疗程,共治疗2个疗程。治疗结束后,测量大鼠血糖、血脂、Scr、BUN的含量;用Western Blot法检测肾组织中转换因子β1及FN蛋白的表达。结果:1.对大鼠一般症状的影响:造模组大鼠少神乏力、活动迟缓、毛色不光泽、饮食量及饮水量逐渐增加。给药治疗后,以上症状明显改善,但相比较而言,灸药结合组大鼠精神状态、毛色及身体灵活度等状态优于内治组及外治组。2.对大鼠FBG的影响:治疗后,各治疗组的血糖值与模型对照组血糖值相比呈下降趋势（P<0.05）并高于空白对照组血糖值;内治组和外治组无显著性差异（P>0.05）,但灸药结合组的血糖值明显优于内治组和外治组（P<0.01）。3.对大鼠血脂的影响:与空白对照组相比,模型对照组TC、TG、LDL-C明显升高（P<0.05）;与模型对照组相比,各治疗组TC、TG、LDL-C含量下降,尤其以灸药结合组差异性更大（P<0.01）;其余四组与空白对照组相比,HDL-C含量明显降低（P<0.05）。4.对大鼠Scr、BUN的影响:模型对照组与空白对照组相比Scr、BUN明显升高（P<0.05）;治疗给药组无论Scr、BUN均较模型对照组低,且差异化有统计学意义,尤其以灸药结合组更明显（P<0.01）;内治组和外治组无显著性差异（P>0.05）。5.Western-Blot法检测肾组织中的TGF-β1及FN:与空白对照组相比,模型对照组的TGF-β1、FN的蛋白表达水平升高,灰度值有统计学意义（P<0.01）;与模型对照组相比,内治组、外治组、内外结合组的TGF-β1及FN蛋白表达含量均显著降低（P<0.01）,具有统计学差异;内治组和外治组的TGF-β1及FN蛋白表达无统计学意义（P>0.05）,与其他治疗组相比的灸药结合组的TGF-β1及FN蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1灸药结合的干预治疗可以改变DN大鼠的一般状态,改善糖尿病肾病早期肾损害的部分病理症状。2灸药结合可以降低血糖、血脂、Scr、BUN的含量,调节糖脂代谢紊乱,能够祛痰活血,化瘀通络。3灸药结合可以下调TGF-β1及FN的蛋白表达,抑制肾小球及肾脏纤维化病变进程,降低肾小球高滤过率,改善肾功能,有效减缓DN的发展。
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