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目的:肺癌是全球最常见的恶性肿瘤,也是癌症相关死亡的主要原因。人们越来越重视膳食因素与肿瘤的发生、发展的关系。叶酸有助于维持DNA完整性、参与体内甲基化反应。研究发现叶酸浓度与肺癌发生风险之间有着某种关系,但结果并非完全一致。本实验通过无叶酸培养肺腺癌H1299细胞,探讨营养物质——叶酸缺乏对其形态、增殖、凋亡、迁移的影响及相关机制。方法:1.将人肺癌细胞株H1299分别置于有、无叶酸培养基中(对照组与实验组)连续培养12d。光学显微镜下观察叶酸缺乏第3d、6d、9d、12d时,细胞形态学变化;并采用活细胞计数及平板克隆实验记录叶酸缺乏对细胞增殖能力的影响。2.采用划痕实验评价叶酸缺乏对H1299细胞迁移能力的影响。3.采用流式细胞术分析H1299细胞周期阻滞及凋亡情况。4.采用Western bolt技术检测两组细胞凋亡相关蛋白及上皮间质转化相关蛋白的表达。结果:1.与对照组相比,叶酸缺乏可使H1299细胞形态异常,且随无叶酸培养时间延长,细胞形态差异更加显著。2.无叶酸培养6d后H1299细胞计数显著低于对照组,随无叶酸培养时间延长,两组之间的差距越发显著,计数差异均具有统计学意义,P<0.01。3.平板克隆实验显示,实验组克隆形成率为(3.16±0.48)%,对照组为(34.46±2.22)%,两组差异具有统计学意义(P<0.05);且实验组克隆体积显著小于对照组。与对照组相比,克隆形成能力较对照组明显减弱。4.细胞划痕实验结果显示:无叶酸培养H1299细胞6d、9d、12d后,24h、48h、72h划痕愈合率均显著低于对照组(P<0.05),随着无叶酸培养时间延长,各时间段划痕愈合率均呈下降趋势,但并无统计学意义(P>0.05)。5.流式细胞术显示,处于S期、G2/M期的对照组细胞百分比分别为(50.44±0.80)%、(8.03±0.41)%,实验组细胞百分比分别为(56.43±0.86)%、(5.83±0.39)%;实验组S期的细胞比率增加、G2/M期减少,差异有统计学意义(P<0.05)。6.流式细胞术显示,无叶酸培养6d、9d、12d后,实验组较对照组凋亡率显著增加,以早期凋亡为主。随无叶酸培养时间延长,差异愈发显著(P<0.05)。7.Western bolt结果显示,与对照组相比,实验组细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-7、Cleaved caspase-9表达增加,上皮间质转化相关蛋白Vimentin表达减少,而E-cadherin两组表达无明显差异。结论:1.叶酸缺乏可使H1299细胞形态异常。2.叶酸缺乏可抑制细胞增殖、迁移及EMT。Vimentin表达的下降进一步支持了叶酸缺乏抑制了细胞迁移能力。3.叶酸缺乏将细胞周期阻滞于S期。4.叶酸缺乏促进肺腺癌H1299细胞凋亡,流式细胞术提示以早期凋亡为主,Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-7、Cleaved caspase-9的表达增加进一步支持了上述结论。