胶质瘤是大脑和脊髓中最常见的恶性肿瘤,呈浸润式生长,且易于复发,患者如果不接受治疗平均生存期仅几个月。高侵袭性是导致胶质瘤患者预后复发的重要原因,常规手术治疗并不能完全切除,结合放化疗稍有成效,目前国内外几种胶质瘤化疗药物已通过临床试验并投入使用,并常以替莫唑胺辅助治疗为主,复发情况还是不可避免的,因此,开发新型有效的抗胶质瘤药物成为了胶质瘤治疗的研究热点。本实验室前期研究发现,多拉菌素（Doramectin,DRM）能明显抑制胶质瘤和食管癌的增殖和迁移,诱导细胞发生自噬和凋亡,并验证了相关死亡机制。本实验将着重探讨DRM对胶质瘤迁移侵袭的影响及作用机制,为DRM的抗胶质瘤作用开发提供理论和数据支撑。为检测DRM对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,首先,通过MTT法检测DRM作用下的细胞活力,明确随DRM浓度的升高,胶质瘤U251和C6细胞的细胞存活率明显降低,IC50值分别为18.22μM和15.78μM,进而确定本实验用药浓度范围为DRM≤20μM;然后通过黏附实验发现,随着DRM浓度的升高,U251和C6细胞的黏附能力受到显著抑制;采用划痕愈合实验及transwell小室实验检测DRM对U251和C6细胞迁移侵袭能力的影响,结果发现,随着DRM浓度的升高,相比于对照组,细胞的划痕愈合距离缩短,穿过小室底膜的细胞数量也逐渐减少,迁移侵袭能力被抑制;通过western blot实验发现用DRM处理的U251和C6细胞中MMP2和MMP9蛋白表达量均低于对照组,而且,随着浓度的升高,抑制程度会更明显。以上结果表明,DRM能明显抑制U251和C6细胞的增殖、迁移和侵袭能力。为了进一步探究DRM抑制胶质瘤细胞迁移侵袭的作用机制,我们对C6细胞的前期高通量测序数据进行整理归纳,对受DRM影响明显的差异基因进行层次聚类、GO、KEGG和蛋白质相互作用（PPI）关联分析,筛选出DRM抗胶质瘤迁移侵袭的关键靶点和通路,并解释其相关作用机制,猜测DRM可能是通过调控THBS1的表达影响Focal adhesion信号通路,进而影响胶质瘤细胞的迁移侵袭;并通过RT-q PCR和western blot验证用DRM处理后U251和C6细胞中THBS1 m RNA和蛋白的表达量变化情况,结果显示,相比对照组,DRM能明显下调THBS1 m RNA和蛋白的表达,这与测序结果保持一致。THBS1在胶质瘤细胞中表达异常,并随胶质瘤分级增加而增加,为探究THBS1促进胶质瘤细胞迁移侵袭的作用机理,使用si RNA技术对U251和C6细胞中THBS1进行沉默,探究THBS1表达的下调对U251和C6细胞的迁移侵袭能力的影响,结果显示,与阴性对照组相比,THBS1表达的下调导致细胞划痕愈合能力减弱,穿过小室底膜的数量显著减少,表明细胞迁移侵袭受到抑制,同时MMP2、MMP9的表达和通路蛋白FAK、Akt的磷酸化情况也受到了抑制。以上结果证明,THBS1表达的下调会通过FAK/Akt信号通路抑制胶质瘤细胞的迁移侵袭。同时,为明确DRM通过靶向THBS1影响胶质瘤迁移侵袭的分子机制,选用临床治疗更有意义的人源胶质瘤U251细胞进行THBS1基因过表达重组载体的转染,实验结果表明过表达THBS1能促进胶质瘤细胞的迁移侵袭,并能逆转DRM对胶质瘤细胞迁移侵袭的抑制作用,也就是说,DRM是通过靶向THBS1调控FAK/Akt信号通路影响胶质瘤细胞的迁移侵袭。综上所述,DRM对胶质瘤细胞增殖、黏附和迁移侵袭均具有明显的抑制作用,具有浓度依赖性,并通过调控THBS1的表达影响FAK/Akt信号通路,对胶质瘤细胞的迁移侵袭产生抑制。因此,DRM有望成为抗胶质瘤的有效靶向化疗药物,提高患者预后生存能力,本实验为进一步推动其临床应用提供了一定的实验基础及理论支撑。