背景及目的肝癌（HCC）作为导致癌症病人死亡的重要原因,对我国人民身体健康造成巨大威胁。正常情况下,肿瘤的治疗方式包括手术切除、化疗和放疗等。但这些治疗方法均具有不同程度的缺点。因此,开发更好的治疗方法成为急需。癌症的发生发展与细胞信号转导异常以及代谢异常密不可分。靶向治疗,即通过运用小分子抑制剂等对肿瘤细胞区别于正常细胞的信号通路和代谢通路中的关键分子进行靶向抑制成为肿瘤治疗的重要手段,并已在临床中产生了瞩目的效果。索拉非尼（Sorafenib）作为一种多激酶抑制剂,通过靶向Raf、VEGFR以及PDGF受体等而抑制血管生成,阻滞细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用。在肿瘤的治疗中,Sorafenib通过调控MAPK、PI3K-AKT等信号通路,进而对肝癌、肺癌、卵巢癌等多种肿瘤细胞都具有程度不同的抑制作用。但Sorafenib单独用药处理在多种肿瘤细胞中效果有限,与其他药物联合使用成为一个极具价值的选择。乙莫克舍（Etomoxir）是肉碱棕榈酰转移酶la（CPTla）的抑制剂,CPTla是细胞脂肪酸氧化降解（FAO）中的关键限速酶。研究表明,在多种癌症中均发现FAO对于癌症的发生发展具有一定的推动作用,并且体外实验表明在鼻咽癌、白血病、乳腺癌、胃癌、肺癌等肿瘤细胞中均已将CPTla用作靶点进行癌症治疗研究。前期实验结果显示Sorafenib单药对肝癌的治疗作用有限。并且单独使用Sorafenib过久后会产生耐药性。本论文探讨了将Sorafenib与Etomoxir联合使用的抗肿瘤作用与机制。本研究的开展,为肿瘤治疗提供新的治疗策略。方法及结果一、索拉非尼（Sorafenib）单药对肿瘤细胞的作用探究1、使用MTT方法检测肝癌以及其他多种类型的肿瘤细胞在使用Sorafenib单药处理后的细胞存活率。结果显示,Sorafenib在体内最大血药浓度下对肿瘤细胞的生长抑制有一定的作用,但作用有限。2、克隆形成实验表明,Sorafenib部分抑制了肿瘤细胞集落的生长。3、免疫印迹结果显示,Sorafenib在抑制MAPK信号通路的同时,反馈激活了 AKT信号通路。二、Etomoxir协同增强Sorafenib的抗肿瘤作用1、利用MTT的方法证实Sorafenib与Etomoxir联合对肝癌细胞的生长具有协同抑制作用,并且在不同浓度下对肝癌细胞生长都有抑制作用。2、Sorafenib与Etomoxir对肝癌细胞生长的协同抑制具有时间以及剂量依赖效应。3、Sorafenib与Etomoxir联合对多种类型的肿瘤细胞都有协同抑制作用。4、克隆形成实验证明,Sorafenib与Etomoxir联合能够协同抑制克隆群落的成长。三、Etomoxir协同增强Sorafenib引起细胞凋亡1、免疫印迹实验证实Sorafenib与Etomoxir联合用药诱导致肿瘤细胞凋亡。2、利用sh-RNA敲低Bax显著降低了由双药联合所导致的细胞凋亡,表明二者可能引起内源性（线粒体途径）的细胞凋亡。四、双药联合诱导凋亡作用机理研究1、免疫印迹实验显示Etomoxir下调凋亡相关蛋白survivin的表达。2、通过基因过表达实验促进survivin的表达,MTT及免疫印迹实验显示,survivin的外源过表达能够显著降低由于双药联合引起的肿瘤细胞凋亡,表明survivin在联合用药诱发肿瘤细胞凋亡中起重要作用。3、免疫印迹实验结果显示,虽然Etomoxir抑制了 p-AKT（S473）蛋白的表达,但联合用药组p-AKT（S473）蛋白的表达与对照组相比并没有明显的变化,推测survivin的表达可能还受其他信号通路的调控。结论及意义Sorafenib对肿瘤细胞生长具有有限的抑制作用。Etomoxir与Sorafenib的联合能够协同抑制肿瘤细胞的生长、促进肿瘤细胞凋亡。通过对双药联合的机理进行探究,揭示了 Etomoxir通过下调survivin的表达,进而协同增强了靶向药物Sorafenib抗肿瘤作用。本研究的开展,揭示了 Sorafenib、Etomoxir等小分子靶向抑制剂的内在的抗肿瘤机制,同时为肿瘤提供新的靶向治疗策略。